热带医学杂志
熱帶醫學雜誌
열대의학잡지
JOURNAL OF TROPICAL MEDICINE
2006年
3期
274-277
,共4页
王海龙%王春芳%赵嘉惠%殷国荣%乔中东
王海龍%王春芳%趙嘉惠%慇國榮%喬中東
왕해룡%왕춘방%조가혜%은국영%교중동
寡霉素敏感相关蛋白%亚克隆%基因改造%膜受体%ATP合成酶/ATP酶
寡黴素敏感相關蛋白%亞剋隆%基因改造%膜受體%ATP閤成酶/ATP酶
과매소민감상관단백%아극륭%기인개조%막수체%ATP합성매/ATP매
目的通过将发生点突变的两个大鼠寡霉素敏感相关蛋白(OSCP)基因进行改造,获得具有正确序列的OSCP基因,在大肠杆菌中表达并进行活性鉴定.方法通过限制性核酸内切酶和T4DNA连接酶将发生错义突变的两个OSCP基因的DNA克隆进行改造,获得具有正确核苷酸序列的OSCP基因;然后将该片段连接进原核表达载体pET-28c(+),构建成重组质粒PET-28c(+)-OSCP;用该重组质粒转化E.coli,转化子在37℃诱导表达相应的融合蛋白,通过Western-blot鉴定.结果酶切及测序显示对OSCP基因错义突变的纠正获得成功.酶切结果显示成功构建了原核表达载体pET-28c(+)-OSCP.IPTG诱导表达4 h后,SDS-PAGE及Western-blot显示诱导表达出分子量约23 000的大鼠寡霉素敏感相关蛋白,且该蛋白具有免疫活性.结论在国内初次表达出大鼠OSCP,表达产物具有免疫反应性,为OSCP的结构及功能研究奠定了基础.
目的通過將髮生點突變的兩箇大鼠寡黴素敏感相關蛋白(OSCP)基因進行改造,穫得具有正確序列的OSCP基因,在大腸桿菌中錶達併進行活性鑒定.方法通過限製性覈痠內切酶和T4DNA連接酶將髮生錯義突變的兩箇OSCP基因的DNA剋隆進行改造,穫得具有正確覈苷痠序列的OSCP基因;然後將該片段連接進原覈錶達載體pET-28c(+),構建成重組質粒PET-28c(+)-OSCP;用該重組質粒轉化E.coli,轉化子在37℃誘導錶達相應的融閤蛋白,通過Western-blot鑒定.結果酶切及測序顯示對OSCP基因錯義突變的糾正穫得成功.酶切結果顯示成功構建瞭原覈錶達載體pET-28c(+)-OSCP.IPTG誘導錶達4 h後,SDS-PAGE及Western-blot顯示誘導錶達齣分子量約23 000的大鼠寡黴素敏感相關蛋白,且該蛋白具有免疫活性.結論在國內初次錶達齣大鼠OSCP,錶達產物具有免疫反應性,為OSCP的結構及功能研究奠定瞭基礎.
목적통과장발생점돌변적량개대서과매소민감상관단백(OSCP)기인진행개조,획득구유정학서렬적OSCP기인,재대장간균중표체병진행활성감정.방법통과한제성핵산내절매화T4DNA련접매장발생착의돌변적량개OSCP기인적DNA극륭진행개조,획득구유정학핵감산서렬적OSCP기인;연후장해편단련접진원핵표체재체pET-28c(+),구건성중조질립PET-28c(+)-OSCP;용해중조질립전화E.coli,전화자재37℃유도표체상응적융합단백,통과Western-blot감정.결과매절급측서현시대OSCP기인착의돌변적규정획득성공.매절결과현시성공구건료원핵표체재체pET-28c(+)-OSCP.IPTG유도표체4 h후,SDS-PAGE급Western-blot현시유도표체출분자량약23 000적대서과매소민감상관단백,차해단백구유면역활성.결론재국내초차표체출대서OSCP,표체산물구유면역반응성,위OSCP적결구급공능연구전정료기출.
