现代医药卫生
現代醫藥衛生
현대의약위생
MODERN MEDICINE HEALTH
2005年
24期
3355-3357
,共3页
siRNA%DNA稳定表达载体%构建%应用
siRNA%DNA穩定錶達載體%構建%應用
siRNA%DNA은정표체재체%구건%응용
目的:构建siRNA的DNA稳定表达载体,为研究RNAi在哺乳动物内持续、稳定抑制靶基因表达奠定基础.方法:合成含靶向hTERT基因的siRNA转录模板的发夹结构,将载体质粒pGenesil-1用BamH1+HindⅢ进行双酶切后,T4DNA连接酶连接成重组质粒,转染到肝癌SMMC-7721细胞中进行稳定筛选、表达,检测稳定筛选前后hTERT基因表达变化.结果:重组质粒在大肠杆菌菌株JM109内扩增.提纯、纯化后用HindⅢ、EcoRI酶切鉴定及测序鉴定证明hTERT-siRNA转录模板完整、正确的插入到pGenesil-1质粒中,建立了稳定抑制hTERT基因的SMMC-7721细胞株,并在mRNA水平抑制了肝癌SMMC-7721细胞hTERT基因表达.结论:成功构建了siRNA-DNA稳定表达载体,能在哺乳动物细胞中表达,并初步应用于靶基因的抑制.
目的:構建siRNA的DNA穩定錶達載體,為研究RNAi在哺乳動物內持續、穩定抑製靶基因錶達奠定基礎.方法:閤成含靶嚮hTERT基因的siRNA轉錄模闆的髮夾結構,將載體質粒pGenesil-1用BamH1+HindⅢ進行雙酶切後,T4DNA連接酶連接成重組質粒,轉染到肝癌SMMC-7721細胞中進行穩定篩選、錶達,檢測穩定篩選前後hTERT基因錶達變化.結果:重組質粒在大腸桿菌菌株JM109內擴增.提純、純化後用HindⅢ、EcoRI酶切鑒定及測序鑒定證明hTERT-siRNA轉錄模闆完整、正確的插入到pGenesil-1質粒中,建立瞭穩定抑製hTERT基因的SMMC-7721細胞株,併在mRNA水平抑製瞭肝癌SMMC-7721細胞hTERT基因錶達.結論:成功構建瞭siRNA-DNA穩定錶達載體,能在哺乳動物細胞中錶達,併初步應用于靶基因的抑製.
목적:구건siRNA적DNA은정표체재체,위연구RNAi재포유동물내지속、은정억제파기인표체전정기출.방법:합성함파향hTERT기인적siRNA전록모판적발협결구,장재체질립pGenesil-1용BamH1+HindⅢ진행쌍매절후,T4DNA련접매련접성중조질립,전염도간암SMMC-7721세포중진행은정사선、표체,검측은정사선전후hTERT기인표체변화.결과:중조질립재대장간균균주JM109내확증.제순、순화후용HindⅢ、EcoRI매절감정급측서감정증명hTERT-siRNA전록모판완정、정학적삽입도pGenesil-1질립중,건립료은정억제hTERT기인적SMMC-7721세포주,병재mRNA수평억제료간암SMMC-7721세포hTERT기인표체.결론:성공구건료siRNA-DNA은정표체재체,능재포유동물세포중표체,병초보응용우파기인적억제.
