生物工程学报
生物工程學報
생물공정학보
CHINESE JOURNAL OF BIOTECHNOLOGY
2005年
6期
884-891
,共8页
蒋建东%顾立锋%孙纪全%代先祝%文阳%李顺鹏
蔣建東%顧立鋒%孫紀全%代先祝%文暘%李順鵬
장건동%고립봉%손기전%대선축%문양%리순붕
同源重组%rDNA%sacB%基因工程菌%农药降解%生物修复
同源重組%rDNA%sacB%基因工程菌%農藥降解%生物脩複
동원중조%rDNA%sacB%기인공정균%농약강해%생물수복
构建遗传稳定的多功能农药降解基因工程菌可以为农药污染的生物修复提供良好的菌种资源,然而,构建遗传稳定且不带入外源抗性的基因工程菌是一个难点.通过以受体菌的16S rDNA为同源重组指导序列、sacB基因为双交换正筛选标记构建同源重组载体,二亲结合的方法将甲基对硫磷水解酶基因(mpd)整合到呋喃丹降解菌Sphingomonas sp.CDS-1染色体的16S rDNA位点,分别成功构建了含1个和2个mpd基因插入到rDNA位点且不带入外源抗性的基因工程菌株CDS-mpd和CDS-2mpd.同源重组单交换的效率为3.7×10-7 ～6.8×10-7.通过PCR和Southern杂交的方法验证了同源重组事件.基因工程菌遗传稳定,能同时降解甲基对硫磷和呋喃丹.甲基对硫磷水解酶(MPH)的比活在各生长时期均高于原始出发菌株,比活最高达6.22 mu/μg.
構建遺傳穩定的多功能農藥降解基因工程菌可以為農藥汙染的生物脩複提供良好的菌種資源,然而,構建遺傳穩定且不帶入外源抗性的基因工程菌是一箇難點.通過以受體菌的16S rDNA為同源重組指導序列、sacB基因為雙交換正篩選標記構建同源重組載體,二親結閤的方法將甲基對硫燐水解酶基因(mpd)整閤到呋喃丹降解菌Sphingomonas sp.CDS-1染色體的16S rDNA位點,分彆成功構建瞭含1箇和2箇mpd基因插入到rDNA位點且不帶入外源抗性的基因工程菌株CDS-mpd和CDS-2mpd.同源重組單交換的效率為3.7×10-7 ～6.8×10-7.通過PCR和Southern雜交的方法驗證瞭同源重組事件.基因工程菌遺傳穩定,能同時降解甲基對硫燐和呋喃丹.甲基對硫燐水解酶(MPH)的比活在各生長時期均高于原始齣髮菌株,比活最高達6.22 mu/μg.
구건유전은정적다공능농약강해기인공정균가이위농약오염적생물수복제공량호적균충자원,연이,구건유전은정차불대입외원항성적기인공정균시일개난점.통과이수체균적16S rDNA위동원중조지도서렬、sacB기인위쌍교환정사선표기구건동원중조재체,이친결합적방법장갑기대류린수해매기인(mpd)정합도부남단강해균Sphingomonas sp.CDS-1염색체적16S rDNA위점,분별성공구건료함1개화2개mpd기인삽입도rDNA위점차불대입외원항성적기인공정균주CDS-mpd화CDS-2mpd.동원중조단교환적효솔위3.7×10-7 ～6.8×10-7.통과PCR화Southern잡교적방법험증료동원중조사건.기인공정균유전은정,능동시강해갑기대류린화부남단.갑기대류린수해매(MPH)적비활재각생장시기균고우원시출발균주,비활최고체6.22 mu/μg.
