第一军医大学学报
第一軍醫大學學報
제일군의대학학보
JOURNAL OF FIRST MILITARY MEDICAL UNIVERSITY
2005年
3期
308-312
,共5页
mIκBα基因%腺病毒载体%基因治疗%大肠杆菌
mIκBα基因%腺病毒載體%基因治療%大腸桿菌
mIκBα기인%선병독재체%기인치료%대장간균
目的通过在大肠杆菌内同源重组,快速、有效地制备含人mIκBα基因的腺病毒重组体的方法,并观察其在肝癌细胞株Hep G2细胞中的表达.方法首先将目的基因mIκBα克隆进结合有绿色荧光蛋白报告基因的穿梭质粒 -pAdTrack-CMV中,将新形成的质粒pAdTrack-CMV-mIκBα用限制性内切酶PmeI线性化后,再与腺病毒骨架质粒-pAdEasy-1一同转化进大肠杆菌株BJ5183细胞中.用对卡那霉素抗性挑选重组体质粒-pAd-mIκBα,并通过限制性内切酶分析,确认重组.最后将线性化后的重组体质粒转染进腺病毒包装细胞株293细胞.腺病毒重组体Ad-mIκBα在7～10 d内产生.借助GFP的表达,测定和观察在293细胞中重组腺病毒的滴度及其在HepG2细胞中的表达.结果经PCR检测提示重组体腺病毒含有mIκBα基因.Ad-mIκBα的滴度是2.7×109PFU/ml.当MOI等于10时,在HepG2细胞中,Ad-mIκBα病毒可有效和稳定地表达,其感染效率24 h为57%,48 h达100%.结论运用在大肠杆菌内同源重组法能有效和方便地构建含目的基因mIκBα的腺病毒重组体Ad-mIκBα.该重组体能在293细胞中扩增,并有效地感染Hep G2细胞.为进一步研究mIκBα基因的功能和该基因治疗肝癌提供了一个良好的基因转导载体.
目的通過在大腸桿菌內同源重組,快速、有效地製備含人mIκBα基因的腺病毒重組體的方法,併觀察其在肝癌細胞株Hep G2細胞中的錶達.方法首先將目的基因mIκBα剋隆進結閤有綠色熒光蛋白報告基因的穿梭質粒 -pAdTrack-CMV中,將新形成的質粒pAdTrack-CMV-mIκBα用限製性內切酶PmeI線性化後,再與腺病毒骨架質粒-pAdEasy-1一同轉化進大腸桿菌株BJ5183細胞中.用對卡那黴素抗性挑選重組體質粒-pAd-mIκBα,併通過限製性內切酶分析,確認重組.最後將線性化後的重組體質粒轉染進腺病毒包裝細胞株293細胞.腺病毒重組體Ad-mIκBα在7～10 d內產生.藉助GFP的錶達,測定和觀察在293細胞中重組腺病毒的滴度及其在HepG2細胞中的錶達.結果經PCR檢測提示重組體腺病毒含有mIκBα基因.Ad-mIκBα的滴度是2.7×109PFU/ml.噹MOI等于10時,在HepG2細胞中,Ad-mIκBα病毒可有效和穩定地錶達,其感染效率24 h為57%,48 h達100%.結論運用在大腸桿菌內同源重組法能有效和方便地構建含目的基因mIκBα的腺病毒重組體Ad-mIκBα.該重組體能在293細胞中擴增,併有效地感染Hep G2細胞.為進一步研究mIκBα基因的功能和該基因治療肝癌提供瞭一箇良好的基因轉導載體.
목적통과재대장간균내동원중조,쾌속、유효지제비함인mIκBα기인적선병독중조체적방법,병관찰기재간암세포주Hep G2세포중적표체.방법수선장목적기인mIκBα극륭진결합유록색형광단백보고기인적천사질립 -pAdTrack-CMV중,장신형성적질립pAdTrack-CMV-mIκBα용한제성내절매PmeI선성화후,재여선병독골가질립-pAdEasy-1일동전화진대장간균주BJ5183세포중.용대잡나매소항성도선중조체질립-pAd-mIκBα,병통과한제성내절매분석,학인중조.최후장선성화후적중조체질립전염진선병독포장세포주293세포.선병독중조체Ad-mIκBα재7～10 d내산생.차조GFP적표체,측정화관찰재293세포중중조선병독적적도급기재HepG2세포중적표체.결과경PCR검측제시중조체선병독함유mIκBα기인.Ad-mIκBα적적도시2.7×109PFU/ml.당MOI등우10시,재HepG2세포중,Ad-mIκBα병독가유효화은정지표체,기감염효솔24 h위57%,48 h체100%.결론운용재대장간균내동원중조법능유효화방편지구건함목적기인mIκBα적선병독중조체Ad-mIκBα.해중조체능재293세포중확증,병유효지감염Hep G2세포.위진일보연구mIκBα기인적공능화해기인치료간암제공료일개량호적기인전도재체.
