复旦学报（医学版）
複旦學報（醫學版）
복단학보（의학판）
FUDAN UNIVERSITY JOURNAL OF MEDICAL SCIENCES
2005年
1期
71-74,85
,共5页
史训龙%冯美卿%贺佳音%袁中一%周珮
史訓龍%馮美卿%賀佳音%袁中一%週珮
사훈룡%풍미경%하가음%원중일%주패
D-氨基酸氧化酶%分离%纯化
D-氨基痠氧化酶%分離%純化
D-안기산양화매%분리%순화
目的以基因工程酵母表达的胞内D-氨基酸氧化酶(DAAO)为原料,通过破细胞,分离纯化DAAO.方法采用机械研磨,反复冻溶,超声波等多种方法破细胞,获得粗酶液,硫酸铵分段沉淀.沉淀透析后,经DEAESephadex A-50,DEAE-DE52,Q-sepharose等离子交换柱进行第一步分离,获得的含酶粗品,再经SephacrylS-100分子筛进一步纯化获得电泳纯的DAAO.结果超声波破壁为最佳的破壁方法,得到的每毫升酶液所含的酶活力是其他破壁方法的两倍以上,最高达到12 000 U/mL.两步硫酸铵沉淀能粗分DAAO,50%硫酸铵沉淀酶回收率可达85%以上.用Q-sepharose、Sephacryl S-100分子筛柱层析两步纯化,酶活力回收率最高可达90%,SDS-PAGE显示单一蛋白条带.结论本实验方法能得到电泳纯的DAAO,总回收率约为40%.
目的以基因工程酵母錶達的胞內D-氨基痠氧化酶(DAAO)為原料,通過破細胞,分離純化DAAO.方法採用機械研磨,反複凍溶,超聲波等多種方法破細胞,穫得粗酶液,硫痠銨分段沉澱.沉澱透析後,經DEAESephadex A-50,DEAE-DE52,Q-sepharose等離子交換柱進行第一步分離,穫得的含酶粗品,再經SephacrylS-100分子篩進一步純化穫得電泳純的DAAO.結果超聲波破壁為最佳的破壁方法,得到的每毫升酶液所含的酶活力是其他破壁方法的兩倍以上,最高達到12 000 U/mL.兩步硫痠銨沉澱能粗分DAAO,50%硫痠銨沉澱酶迴收率可達85%以上.用Q-sepharose、Sephacryl S-100分子篩柱層析兩步純化,酶活力迴收率最高可達90%,SDS-PAGE顯示單一蛋白條帶.結論本實驗方法能得到電泳純的DAAO,總迴收率約為40%.
목적이기인공정효모표체적포내D-안기산양화매(DAAO)위원료,통과파세포,분리순화DAAO.방법채용궤계연마,반복동용,초성파등다충방법파세포,획득조매액,류산안분단침정.침정투석후,경DEAESephadex A-50,DEAE-DE52,Q-sepharose등리자교환주진행제일보분리,획득적함매조품,재경SephacrylS-100분자사진일보순화획득전영순적DAAO.결과초성파파벽위최가적파벽방법,득도적매호승매액소함적매활력시기타파벽방법적량배이상,최고체도12 000 U/mL.량보류산안침정능조분DAAO,50%류산안침정매회수솔가체85%이상.용Q-sepharose、Sephacryl S-100분자사주층석량보순화,매활력회수솔최고가체90%,SDS-PAGE현시단일단백조대.결론본실험방법능득도전영순적DAAO,총회수솔약위40%.
