CAJ | 학술논문

采用直接注射的方法,将脂质体包裹的含人乳铁蛋白基因的重组质粒pLNCXHLF注入兔睾丸组织和羊输精管中,一个月后分别与正常雌兔及正常的母羊交配.所产仔兔均为活体,经PCR和Southern检测,转基因仔兔阳性率平均为35%(11/31);羔羊经引物F1/R1系统PCR检测阳性率为33.3%(4/12),F2/R2系统PCR检测阳性率为25%(3/12).将流产羔羊组织解剖后提取舌、肺、肝脏、肌肉、皮肤、脑、生殖腺、脾脏、小肠、心脏、肾脏共11种组织的总DNA进行PCR检测,发现:F1/R1和F2/R2系统PCR检测出阳性信号存在于不同组织;F2/R2PCR系统检测阳性信号较F1/R1PCR系统少;而且各种组织的外源DNA存在的拷贝数不等,造成阳性信号的强弱程度不同.结果表明:1)脂质体包裹外源基因转染精子的方法,可将外源基因导入受精卵,并得到了较高的转基因阳性率;2)精子携带外源DNA的整合过程是随机的,在受精过程和胚胎早期分化过程中可能发生了片段丢失、不完全整合或游离于基因组存在而产生嵌合体.本文的研究结果证明了该方法是一种简捷有效的新途径,为进一步深入探讨精子介导转基因动物制备可行性奠定了基础,给精子载体法制备转基因哺乳动物研究提供了有价值的参考.
채용직접주사적방법,장지질체포과적함인유철단백기인적중조질립pLNCXHLF주입토고환조직화양수정관중,일개월후분별여정상자토급정상적모양교배.소산자토균위활체,경PCR화Southern검측,전기인자토양성솔평균위35%(11/31);고양경인물F1/R1계통PCR검측양성솔위33.3%(4/12),F2/R2계통PCR검측양성솔위25%(3/12).장유산고양조직해부후제취설、폐、간장、기육、피부、뇌、생식선、비장、소장、심장、신장공11충조직적총DNA진행PCR검측,발현:F1/R1화F2/R2계통PCR검측출양성신호존재우불동조직;F2/R2PCR계통검측양성신호교F1/R1PCR계통소;이차각충조직적외원DNA존재적고패수불등,조성양성신호적강약정도불동.결과표명:1)지질체포과외원기인전염정자적방법,가장외원기인도입수정란,병득도료교고적전기인양성솔;2)정자휴대외원DNA적정합과정시수궤적,재수정과정화배태조기분화과정중가능발생료편단주실、불완전정합혹유리우기인조존재이산생감합체.본문적연구결과증명료해방법시일충간첩유효적신도경,위진일보심입탐토정자개도전기인동물제비가행성전정료기출,급정자재체법제비전기인포유동물연구제공료유개치적삼고.