中国人兽共患病杂志
中國人獸共患病雜誌
중국인수공환병잡지
CHINESE JOURNAL OF ZOONOSES
1999年
1期
23-26
,共4页
方建民%余新炳%罗树红%王善青%蔡贤铮%潘波
方建民%餘新炳%囉樹紅%王善青%蔡賢錚%潘波
방건민%여신병%라수홍%왕선청%채현쟁%반파
恶性疟原虫%组氨酸富集蛋白Ⅱ%大肠杆菌
噁性瘧原蟲%組氨痠富集蛋白Ⅱ%大腸桿菌
악성학원충%조안산부집단백Ⅱ%대장간균
目的恶性疟原虫组氨酸富集蛋白Ⅱ(Histidine-rich protein Ⅱ,HRPⅡ)是疟原虫红内期生活史过程中从感染红细胞分泌至血浆中的水溶性抗原,是重要的诊断用抗原.本文通过实现恶性疟原虫HRP Ⅱ在大肠杆菌中的表达,为研制用于疟疾诊断的抗HRP Ⅱ单克隆抗体奠定基础.方法将含有HRP Ⅱ抗原基因的重组表达质粒HRP Ⅱ/pET8c用钙法转化大肠杆菌BL21(DE3),重组子经聚合酶链反应(PCR)和Bam HI与BglⅡ双酶切鉴定.重组子HRP Ⅱ/pET8c/BL21(DE3)在28℃条件下,用1mM IPTG诱导表达,SDS-PAGE和Western免疫印迹分析表达产物.结果成功构建HRP Ⅱ/pET8c重组质粒,在低温条件下经IPTG诱导,HRP Ⅱ呈可溶性、非融合性表达,SDS-PAGE分析表明表达产物的分子量约33kDa,薄层扫描显示表达蛋白占菌体总蛋白的20.76%.Western免疫印迹表明,表达产物能被抗HRP Ⅱ人工合成九肽单克隆抗体特异识别.结论恶性疟原虫HRP Ⅱ在原核表达系统pET8c/BL21(DE3)中获得成功表达,为基因工程大规模制备生产HRP Ⅱ抗原奠定基础.
目的噁性瘧原蟲組氨痠富集蛋白Ⅱ(Histidine-rich protein Ⅱ,HRPⅡ)是瘧原蟲紅內期生活史過程中從感染紅細胞分泌至血漿中的水溶性抗原,是重要的診斷用抗原.本文通過實現噁性瘧原蟲HRP Ⅱ在大腸桿菌中的錶達,為研製用于瘧疾診斷的抗HRP Ⅱ單剋隆抗體奠定基礎.方法將含有HRP Ⅱ抗原基因的重組錶達質粒HRP Ⅱ/pET8c用鈣法轉化大腸桿菌BL21(DE3),重組子經聚閤酶鏈反應(PCR)和Bam HI與BglⅡ雙酶切鑒定.重組子HRP Ⅱ/pET8c/BL21(DE3)在28℃條件下,用1mM IPTG誘導錶達,SDS-PAGE和Western免疫印跡分析錶達產物.結果成功構建HRP Ⅱ/pET8c重組質粒,在低溫條件下經IPTG誘導,HRP Ⅱ呈可溶性、非融閤性錶達,SDS-PAGE分析錶明錶達產物的分子量約33kDa,薄層掃描顯示錶達蛋白佔菌體總蛋白的20.76%.Western免疫印跡錶明,錶達產物能被抗HRP Ⅱ人工閤成九肽單剋隆抗體特異識彆.結論噁性瘧原蟲HRP Ⅱ在原覈錶達繫統pET8c/BL21(DE3)中穫得成功錶達,為基因工程大規模製備生產HRP Ⅱ抗原奠定基礎.
목적악성학원충조안산부집단백Ⅱ(Histidine-rich protein Ⅱ,HRPⅡ)시학원충홍내기생활사과정중종감염홍세포분비지혈장중적수용성항원,시중요적진단용항원.본문통과실현악성학원충HRP Ⅱ재대장간균중적표체,위연제용우학질진단적항HRP Ⅱ단극륭항체전정기출.방법장함유HRP Ⅱ항원기인적중조표체질립HRP Ⅱ/pET8c용개법전화대장간균BL21(DE3),중조자경취합매련반응(PCR)화Bam HI여BglⅡ쌍매절감정.중조자HRP Ⅱ/pET8c/BL21(DE3)재28℃조건하,용1mM IPTG유도표체,SDS-PAGE화Western면역인적분석표체산물.결과성공구건HRP Ⅱ/pET8c중조질립,재저온조건하경IPTG유도,HRP Ⅱ정가용성、비융합성표체,SDS-PAGE분석표명표체산물적분자량약33kDa,박층소묘현시표체단백점균체총단백적20.76%.Western면역인적표명,표체산물능피항HRP Ⅱ인공합성구태단극륭항체특이식별.결론악성학원충HRP Ⅱ재원핵표체계통pET8c/BL21(DE3)중획득성공표체,위기인공정대규모제비생산HRP Ⅱ항원전정기출.
