南京农业大学学报
南京農業大學學報
남경농업대학학보
JOURNAL OF NANJING AGRICULTURAL UNIVERSITY
2003年
1期
61-65
,共5页
刘永庆%刘文波%潘杰彦%杜念兴%陈溥言%赵国屏
劉永慶%劉文波%潘傑彥%杜唸興%陳溥言%趙國屏
류영경%류문파%반걸언%두념흥%진부언%조국병
生长抑素(SS)%pET-32表达系统%异丙基硫代-β-D-半乳糖苷(IPTG)%乳糖%融合蛋白
生長抑素(SS)%pET-32錶達繫統%異丙基硫代-β-D-半乳糖苷(IPTG)%乳糖%融閤蛋白
생장억소(SS)%pET-32표체계통%이병기류대-β-D-반유당감(IPTG)%유당%융합단백
分别将SS基因克隆至pET-32a和pET-32c表达系统中,得到重组质粒SS-N/X和SS-N/S.实验结果表明,SS-N/X-Thioredoxin(硫氧还原蛋白)和SS-N/S-Thioredoxin融合蛋白在IPTG(异丙基硫代-β-D-半乳糖苷)诱导3 h后(37 ℃)表达产量最高,约占菌体总蛋白的30%左右.0.05～1 mmol*L-1 IPTG对SS融合蛋白表达产量的影响并不太大,0.05 mmol*L-1 IPTG即可达到有效的诱导效果,但单位体积内的表达产量以0.5 mmol*L-1时为最高.乳糖诱导4 h(37 ℃)的效果明显低于IPTG,但当培养时间延长至8 h时,20 mg*mL-1的乳糖可达到与IPTG同样的诱导效果,10和5 mg*mL-1的乳糖也可接近IPTG的诱导效果.SS-N/X融合蛋白在26 ℃表达时,主要以可溶性形式存在,占75.8%,包涵体仅占24.2%;而SS-N/S融合蛋白则主要以包涵体形式存在,占60.2%,可溶性蛋白仅占39.8%.SS可溶性融合蛋白具有良好的SS抗原性.
分彆將SS基因剋隆至pET-32a和pET-32c錶達繫統中,得到重組質粒SS-N/X和SS-N/S.實驗結果錶明,SS-N/X-Thioredoxin(硫氧還原蛋白)和SS-N/S-Thioredoxin融閤蛋白在IPTG(異丙基硫代-β-D-半乳糖苷)誘導3 h後(37 ℃)錶達產量最高,約佔菌體總蛋白的30%左右.0.05～1 mmol*L-1 IPTG對SS融閤蛋白錶達產量的影響併不太大,0.05 mmol*L-1 IPTG即可達到有效的誘導效果,但單位體積內的錶達產量以0.5 mmol*L-1時為最高.乳糖誘導4 h(37 ℃)的效果明顯低于IPTG,但噹培養時間延長至8 h時,20 mg*mL-1的乳糖可達到與IPTG同樣的誘導效果,10和5 mg*mL-1的乳糖也可接近IPTG的誘導效果.SS-N/X融閤蛋白在26 ℃錶達時,主要以可溶性形式存在,佔75.8%,包涵體僅佔24.2%;而SS-N/S融閤蛋白則主要以包涵體形式存在,佔60.2%,可溶性蛋白僅佔39.8%.SS可溶性融閤蛋白具有良好的SS抗原性.
분별장SS기인극륭지pET-32a화pET-32c표체계통중,득도중조질립SS-N/X화SS-N/S.실험결과표명,SS-N/X-Thioredoxin(류양환원단백)화SS-N/S-Thioredoxin융합단백재IPTG(이병기류대-β-D-반유당감)유도3 h후(37 ℃)표체산량최고,약점균체총단백적30%좌우.0.05～1 mmol*L-1 IPTG대SS융합단백표체산량적영향병불태대,0.05 mmol*L-1 IPTG즉가체도유효적유도효과,단단위체적내적표체산량이0.5 mmol*L-1시위최고.유당유도4 h(37 ℃)적효과명현저우IPTG,단당배양시간연장지8 h시,20 mg*mL-1적유당가체도여IPTG동양적유도효과,10화5 mg*mL-1적유당야가접근IPTG적유도효과.SS-N/X융합단백재26 ℃표체시,주요이가용성형식존재,점75.8%,포함체부점24.2%;이SS-N/S융합단백칙주요이포함체형식존재,점60.2%,가용성단백부점39.8%.SS가용성융합단백구유량호적SS항원성.
