肿瘤
腫瘤
종류
TUMOR
2002年
6期
445-447
,共3页
马春树%由江峰%郑杰%王洁良%崔湘琳%吴秉铨
馬春樹%由江峰%鄭傑%王潔良%崔湘琳%吳秉銓
마춘수%유강봉%정걸%왕길량%최상림%오병전
绿色荧光蛋白%转染%肿瘤转移
綠色熒光蛋白%轉染%腫瘤轉移
록색형광단백%전염%종류전이
目的明确肿瘤转移相关基因TMSG-1编码蛋白在细胞内的定位.方法计算机分析TMSG-1的跨膜区,构建GFP与TMSG-1融合蛋白表达载体pEGFP-C1-TMSG-1,以LipofectAMINE介导转染人前列腺癌细胞PC-3M-1E8,荧光显微镜与共聚焦显微镜下观察.结果计算机分析表明所示,TMSG-1有四个跨膜区(aa33～48,aa64～79,aa114～130,aa158～174),推测其为跨膜蛋白.PSORTⅡ软件分析TMSG-1蛋白定位于胞浆(可靠性94.1%),具体位置为内质网66.7%、线粒体11.1%、质膜11.1%、高尔基体11.1%.显微镜下观察TMSG-1-GFP融合蛋白表达于胞浆,呈不均匀的颗粒状、环状分布;而对照的1GFP蛋白则在胞核和胞浆呈弥漫性分布.结论TMSG-1蛋白定位于细胞内膜系统;利用GFP进行的亚细胞定位具有精确、快速、可重复等优点,是研究基因与蛋白定位的有效方法.
目的明確腫瘤轉移相關基因TMSG-1編碼蛋白在細胞內的定位.方法計算機分析TMSG-1的跨膜區,構建GFP與TMSG-1融閤蛋白錶達載體pEGFP-C1-TMSG-1,以LipofectAMINE介導轉染人前列腺癌細胞PC-3M-1E8,熒光顯微鏡與共聚焦顯微鏡下觀察.結果計算機分析錶明所示,TMSG-1有四箇跨膜區(aa33～48,aa64～79,aa114～130,aa158～174),推測其為跨膜蛋白.PSORTⅡ軟件分析TMSG-1蛋白定位于胞漿(可靠性94.1%),具體位置為內質網66.7%、線粒體11.1%、質膜11.1%、高爾基體11.1%.顯微鏡下觀察TMSG-1-GFP融閤蛋白錶達于胞漿,呈不均勻的顆粒狀、環狀分佈;而對照的1GFP蛋白則在胞覈和胞漿呈瀰漫性分佈.結論TMSG-1蛋白定位于細胞內膜繫統;利用GFP進行的亞細胞定位具有精確、快速、可重複等優點,是研究基因與蛋白定位的有效方法.
목적명학종류전이상관기인TMSG-1편마단백재세포내적정위.방법계산궤분석TMSG-1적과막구,구건GFP여TMSG-1융합단백표체재체pEGFP-C1-TMSG-1,이LipofectAMINE개도전염인전렬선암세포PC-3M-1E8,형광현미경여공취초현미경하관찰.결과계산궤분석표명소시,TMSG-1유사개과막구(aa33～48,aa64～79,aa114～130,aa158～174),추측기위과막단백.PSORTⅡ연건분석TMSG-1단백정위우포장(가고성94.1%),구체위치위내질망66.7%、선립체11.1%、질막11.1%、고이기체11.1%.현미경하관찰TMSG-1-GFP융합단백표체우포장,정불균균적과립상、배상분포;이대조적1GFP단백칙재포핵화포장정미만성분포.결론TMSG-1단백정위우세포내막계통;이용GFP진행적아세포정위구유정학、쾌속、가중복등우점,시연구기인여단백정위적유효방법.
