CAJ | 학술논문

目的探索建立一种富集CD4+细胞的方法,藉以提高免疫细胞化学法计数Th1/Th2细胞的准确性.方法取21份健康人外周抗凝血,无菌条件下分离单个核细胞(PBMC),用CD4 McAb包被24孔细胞培养板,加入PBMC,温育后吸弃未结合细胞,继而吸打使结合于板上的细胞脱落,收集细胞(阳性选择);用CD8McAb、CD16 McAb、WuB McAb包被24孔细胞培养板,加入PBMC,温育后吸取未结合细胞(阴性选择).用生物素链霉亲和素免疫细胞化学法检测富集前及用两种选择方法富集所得细胞中CD4+细胞,计算百分率、活细胞率和CD4+细胞回收率.结果富集前21份样品的PBMC中CD4+细胞百分率43.7%±3.1%,经阳性选择和阴性选择后CD4+细胞百分率分别为90.9%±2.8%和76.2%±2.5%,经卡方检验,x2＞x2 0.001,差异有非常显著性,阳性选择富集的CD4+细胞纯度显著高于阴性选择.经阳性选择和阴性选择后,CD4+细胞回收率分别为64.3%±4.9%和69.7%±5.2%,经卡方检验x2＞x2 0.001,差异有非常显著性,阴性选择法的细胞回收率明显高于阳性选择法.富集后活细胞率保持在95%以上.结论所建立的固相单抗方法可有效富集CD4+细胞并保持很高的活细胞率,其中阳性选择是首选方法;CD4+细胞富集是用免疫细胞化学法对PBMC作细胞内细胞因子的检测以准确计数Th1/Th2的必要预处理步骤.
목적탐색건립일충부집CD4+세포적방법,자이제고면역세포화학법계수Th1/Th2세포적준학성.방법취21빈건강인외주항응혈,무균조건하분리단개핵세포(PBMC),용CD4 McAb포피24공세포배양판,가입PBMC,온육후흡기미결합세포,계이흡타사결합우판상적세포탈락,수집세포(양성선택);용CD8McAb、CD16 McAb、WuB McAb포피24공세포배양판,가입PBMC,온육후흡취미결합세포(음성선택).용생물소련매친화소면역세포화학법검측부집전급용량충선택방법부집소득세포중CD4+세포,계산백분솔、활세포솔화CD4+세포회수솔.결과부집전21빈양품적PBMC중CD4+세포백분솔43.7%±3.1%,경양성선택화음성선택후CD4+세포백분솔분별위90.9%±2.8%화76.2%±2.5%,경잡방검험,x2＞x2 0.001,차이유비상현저성,양성선택부집적CD4+세포순도현저고우음성선택.경양성선택화음성선택후,CD4+세포회수솔분별위64.3%±4.9%화69.7%±5.2%,경잡방검험x2＞x2 0.001,차이유비상현저성,음성선택법적세포회수솔명현고우양성선택법.부집후활세포솔보지재95%이상.결론소건립적고상단항방법가유효부집CD4+세포병보지흔고적활세포솔,기중양성선택시수선방법;CD4+세포부집시용면역세포화학법대PBMC작세포내세포인자적검측이준학계수Th1/Th2적필요예처리보취.