中国实用妇科与产科杂志
中國實用婦科與產科雜誌
중국실용부과여산과잡지
CHINESE JOURNAL OF PRACTICAL GYNECOLOGY AND OBSTETRICS
2002年
4期
217-220
,共4页
刘广芝%冯捷%叶雪%张辛燕%钱和年
劉廣芝%馮捷%葉雪%張辛燕%錢和年
류엄지%풍첩%협설%장신연%전화년
卵巢癌/人 永生化 细胞系 猴肾病毒40 T抗原基因
卵巢癌/人 永生化 細胞繫 猴腎病毒40 T抗原基因
란소암/인 영생화 세포계 후신병독40 T항원기인
目的建立人卵巢癌永生化细胞系,为卵巢癌体外研究提供实验模型.方法利用基因重组技术构建猴肾病毒40(SV40)T抗原基因的高效真核表达载体pcD2-SV40.将其转染10例原代培养的早期传代细胞,经G418筛选,抗性克隆扩大培养,建立永生化细胞系.免疫组化检测细胞的上皮起源,用PCR、RT-PCR和Southern Blot方法鉴定SV40 T基因在转染细胞中的表达.观察所建立的永生化细胞系的染色体核型.结果 10例转染细胞中,6例筛选出抗性克隆.角蛋白免疫组化证实3例为上皮起源.其中2例上皮起源细胞得以扩大培养成系,长期稳定传代,分别命名为BUPH:OVSC-2和BUPH:OVCA-3.经鉴定两种细胞系中存在SV40 T在基因水平及转录水平的表达.其染色体核型均符合人体恶性细胞特征.结论利用SV40 T抗原基因进行人卵巢癌原代细胞的永生化是一种可行的、可重复的建系方法,可提高卵巢癌细胞成系机率.
目的建立人卵巢癌永生化細胞繫,為卵巢癌體外研究提供實驗模型.方法利用基因重組技術構建猴腎病毒40(SV40)T抗原基因的高效真覈錶達載體pcD2-SV40.將其轉染10例原代培養的早期傳代細胞,經G418篩選,抗性剋隆擴大培養,建立永生化細胞繫.免疫組化檢測細胞的上皮起源,用PCR、RT-PCR和Southern Blot方法鑒定SV40 T基因在轉染細胞中的錶達.觀察所建立的永生化細胞繫的染色體覈型.結果 10例轉染細胞中,6例篩選齣抗性剋隆.角蛋白免疫組化證實3例為上皮起源.其中2例上皮起源細胞得以擴大培養成繫,長期穩定傳代,分彆命名為BUPH:OVSC-2和BUPH:OVCA-3.經鑒定兩種細胞繫中存在SV40 T在基因水平及轉錄水平的錶達.其染色體覈型均符閤人體噁性細胞特徵.結論利用SV40 T抗原基因進行人卵巢癌原代細胞的永生化是一種可行的、可重複的建繫方法,可提高卵巢癌細胞成繫機率.
목적건립인란소암영생화세포계,위란소암체외연구제공실험모형.방법이용기인중조기술구건후신병독40(SV40)T항원기인적고효진핵표체재체pcD2-SV40.장기전염10례원대배양적조기전대세포,경G418사선,항성극륭확대배양,건립영생화세포계.면역조화검측세포적상피기원,용PCR、RT-PCR화Southern Blot방법감정SV40 T기인재전염세포중적표체.관찰소건립적영생화세포계적염색체핵형.결과 10례전염세포중,6례사선출항성극륭.각단백면역조화증실3례위상피기원.기중2례상피기원세포득이확대배양성계,장기은정전대,분별명명위BUPH:OVSC-2화BUPH:OVCA-3.경감정량충세포계중존재SV40 T재기인수평급전록수평적표체.기염색체핵형균부합인체악성세포특정.결론이용SV40 T항원기인진행인란소암원대세포적영생화시일충가행적、가중복적건계방법,가제고란소암세포성계궤솔.
