CAJ | 학술논문

背景与目的:将不同类型的耐药基因同时导入造血细胞,以扩大耐药范围和进行体内选择是基因治疗的重要策略,这类载体基因片段较长,进行基因转移有一定的难度.本研究旨在寻找安全有效的长片段基因转移途径.方法:将携带不同类型的耐药基因醛脱氢酶基因(ALDH1)和多药耐药基因(MDR1)的逆转录病毒载体G1Na-AIM以NdeI酶切线性化,电穿孔法转导PA317细胞,经长春新碱(VCR)和4-氢过氧化环磷酰胺(4-HC)选择后,应用Southern blot法确定原病毒的整合,逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)和流式细胞术(FCM)分析转移基因的表达,筑巢式聚合酶链反应(nested PCR)检验转移系统的安全性.结果:电穿孔法有效介导了ALDH1与MDR1基因的同时转移,Southern blot法证实ALDH1与MDR1基因稳定整合至宿主细胞基因组,RT-PCR检测到转移基因的转录,FCM测定下游基因MDR1蛋白表达增高4倍,转导率达98%.nested PCR未检测到辅助病毒(env).结论:电穿孔法安全有效地介导了ALDH1与MDR1基因的共转移和高表达.
배경여목적:장불동류형적내약기인동시도입조혈세포,이확대내약범위화진행체내선택시기인치료적중요책략,저류재체기인편단교장,진행기인전이유일정적난도.본연구지재심조안전유효적장편단기인전이도경.방법:장휴대불동류형적내약기인철탈경매기인(ALDH1)화다약내약기인(MDR1)적역전록병독재체G1Na-AIM이NdeI매절선성화,전천공법전도PA317세포,경장춘신감(VCR)화4-경과양화배린선알(4-HC)선택후,응용Southern blot법학정원병독적정합,역전록취합매련반응(RT-PCR)화류식세포술(FCM)분석전이기인적표체,축소식취합매련반응(nested PCR)검험전이계통적안전성.결과:전천공법유효개도료ALDH1여MDR1기인적동시전이,Southern blot법증실ALDH1여MDR1기인은정정합지숙주세포기인조,RT-PCR검측도전이기인적전록,FCM측정하유기인MDR1단백표체증고4배,전도솔체98%.nested PCR미검측도보조병독(env).결론:전천공법안전유효지개도료ALDH1여MDR1기인적공전이화고표체.