中国实验动物学报
中國實驗動物學報
중국실험동물학보
ACTA LABORATORIUM ANIMALIS SCIENTIA SINICA
2002年
2期
86-90
,共5页
杂交%聚合酶链反应%文库
雜交%聚閤酶鏈反應%文庫
잡교%취합매련반응%문고
目的以人apoE7基因制备的高脂血症转基因小鼠模型已建成,要用于探查这一突变基因致病的分子机制,首先揭示人apoE7在小鼠体内诱发了那些基因的表达异常,是重要的环节之一.cDNA削减文库是寻找异常高表达的已知和未知基因有效的手段,而cDNA文库更是获取全长基因所必须.方法自正常小鼠与转基因小鼠肾脏同时提取总RNA,再分离mRNA,逆转录制备cDNA后,用两次分子杂交削除转基因鼠cDNA中与正常小鼠相同的部分,再用PCR与择需PCR法扩增转基因鼠特异的基因,克隆入pGEM-T载体后,制备削减文库.未经削减的转基因小鼠cDNA克隆入λgt11载体,制备基因表达文库.结果和结论自高脂血症转基因小鼠肾脏构建的削减文库得到约400个削减克隆,测定了部分克隆的序列,并进行同源性比较.λgt11/cDNA文库滴度1.7×107 pfu/ml,随机测定的克隆其插入片段长约500bp以上.
目的以人apoE7基因製備的高脂血癥轉基因小鼠模型已建成,要用于探查這一突變基因緻病的分子機製,首先揭示人apoE7在小鼠體內誘髮瞭那些基因的錶達異常,是重要的環節之一.cDNA削減文庫是尋找異常高錶達的已知和未知基因有效的手段,而cDNA文庫更是穫取全長基因所必鬚.方法自正常小鼠與轉基因小鼠腎髒同時提取總RNA,再分離mRNA,逆轉錄製備cDNA後,用兩次分子雜交削除轉基因鼠cDNA中與正常小鼠相同的部分,再用PCR與擇需PCR法擴增轉基因鼠特異的基因,剋隆入pGEM-T載體後,製備削減文庫.未經削減的轉基因小鼠cDNA剋隆入λgt11載體,製備基因錶達文庫.結果和結論自高脂血癥轉基因小鼠腎髒構建的削減文庫得到約400箇削減剋隆,測定瞭部分剋隆的序列,併進行同源性比較.λgt11/cDNA文庫滴度1.7×107 pfu/ml,隨機測定的剋隆其插入片段長約500bp以上.
목적이인apoE7기인제비적고지혈증전기인소서모형이건성,요용우탐사저일돌변기인치병적분자궤제,수선게시인apoE7재소서체내유발료나사기인적표체이상,시중요적배절지일.cDNA삭감문고시심조이상고표체적이지화미지기인유효적수단,이cDNA문고경시획취전장기인소필수.방법자정상소서여전기인소서신장동시제취총RNA,재분리mRNA,역전록제비cDNA후,용량차분자잡교삭제전기인서cDNA중여정상소서상동적부분,재용PCR여택수PCR법확증전기인서특이적기인,극륭입pGEM-T재체후,제비삭감문고.미경삭감적전기인소서cDNA극륭입λgt11재체,제비기인표체문고.결과화결론자고지혈증전기인소서신장구건적삭감문고득도약400개삭감극륭,측정료부분극륭적서렬,병진행동원성비교.λgt11/cDNA문고적도1.7×107 pfu/ml,수궤측정적극륭기삽입편단장약500bp이상.
