上海第二医科大学学报
上海第二醫科大學學報
상해제이의과대학학보
ACTA UNIVERSITATIS MEDICINALIS SECONDAE SHANGHAI
2002年
2期
124-127
,共4页
李广恒%侯筱魁%杨冠珍%吴祥甫
李廣恆%侯篠魁%楊冠珍%吳祥甫
리엄항%후소괴%양관진%오상보
BMP-4cDNA%克隆%表达
BMP-4cDNA%剋隆%錶達
BMP-4cDNA%극륭%표체
目的利用原核基因工程生产有诱骨活性的骨形态发生蛋白-4(BMP-4). 方法应用RT-PCR技术,从成熟人的胎盘组织中扩增出长0.34Kb编码人骨形态发生蛋白-4成熟肽的基因序列,经测序证实后,装入表达载体pET-22b,诱导表达后SDS-PAGE显示在14kd处有一明显的表达条带.经初步鉴定,证实表达蛋白部分位于裂菌处理后的上清中,部分以包涵体的形式存在于沉淀中.将沉淀中的包涵体蛋白纯化、变性和复性处理,和上清中的蛋白分别经真空冷冻干燥后,植入小鼠的肌肉内检测蛋白活性. 结果第14d和21d,组织切片可见骨细胞和骨基质的形成. 结论大肠杆菌表达的BMP-4经复性处理后具有诱骨活性.
目的利用原覈基因工程生產有誘骨活性的骨形態髮生蛋白-4(BMP-4). 方法應用RT-PCR技術,從成熟人的胎盤組織中擴增齣長0.34Kb編碼人骨形態髮生蛋白-4成熟肽的基因序列,經測序證實後,裝入錶達載體pET-22b,誘導錶達後SDS-PAGE顯示在14kd處有一明顯的錶達條帶.經初步鑒定,證實錶達蛋白部分位于裂菌處理後的上清中,部分以包涵體的形式存在于沉澱中.將沉澱中的包涵體蛋白純化、變性和複性處理,和上清中的蛋白分彆經真空冷凍榦燥後,植入小鼠的肌肉內檢測蛋白活性. 結果第14d和21d,組織切片可見骨細胞和骨基質的形成. 結論大腸桿菌錶達的BMP-4經複性處理後具有誘骨活性.
목적이용원핵기인공정생산유유골활성적골형태발생단백-4(BMP-4). 방법응용RT-PCR기술,종성숙인적태반조직중확증출장0.34Kb편마인골형태발생단백-4성숙태적기인서렬,경측서증실후,장입표체재체pET-22b,유도표체후SDS-PAGE현시재14kd처유일명현적표체조대.경초보감정,증실표체단백부분위우렬균처리후적상청중,부분이포함체적형식존재우침정중.장침정중적포함체단백순화、변성화복성처리,화상청중적단백분별경진공냉동간조후,식입소서적기육내검측단백활성. 결과제14d화21d,조직절편가견골세포화골기질적형성. 결론대장간균표체적BMP-4경복성처리후구유유골활성.
