中国药理学与毒理学杂志
中國藥理學與毒理學雜誌
중국약이학여독이학잡지
CHINESE JOURNAL OF PHARMACOLOGY AND TOXICOLOGY
2005年
2期
113-117
,共5页
智庆文%李前%王淑豪%王玉霞%李仕贵%孙曼霁
智慶文%李前%王淑豪%王玉霞%李仕貴%孫曼霽
지경문%리전%왕숙호%왕옥하%리사귀%손만제
融合蛋白质类%谷胱甘肽转移酶%生长物质%基因表达
融閤蛋白質類%穀胱甘肽轉移酶%生長物質%基因錶達
융합단백질류%곡광감태전이매%생장물질%기인표체
目的通过融合蛋白的表达使人表皮生长因子(hEGF)易于纯化.方法构建基于tac启动子的pGEX 4T-1-hEGF原核表达载体,转化大肠杆菌BL21(DE3),以异丙基-1-硫代-β-D半乳糖苷诱导,表达谷胱甘肽-S-转移酶(GST)-hEGF融合蛋白.结果表达产物占细菌总蛋白的34%.部分为可溶性的,部分形成包涵体.菌体裂解上清液经Glutathione Sepharose 4B纯化后,SDS-PAGE电泳出现一条32 ku蛋白条带,与GST-hEGF融合蛋白的计算分子量相符.菌体裂解液中的可溶性GST-hEGF的产率为63 mg·L-1.将其添加到培养的HEK-293细胞中,能明显促进该细胞的分裂和生长.结论成功地构建并表达了GST-hEGF融合蛋白基因,其表达产物GST-hEGF显示良好的促细胞增殖活性.
目的通過融閤蛋白的錶達使人錶皮生長因子(hEGF)易于純化.方法構建基于tac啟動子的pGEX 4T-1-hEGF原覈錶達載體,轉化大腸桿菌BL21(DE3),以異丙基-1-硫代-β-D半乳糖苷誘導,錶達穀胱甘肽-S-轉移酶(GST)-hEGF融閤蛋白.結果錶達產物佔細菌總蛋白的34%.部分為可溶性的,部分形成包涵體.菌體裂解上清液經Glutathione Sepharose 4B純化後,SDS-PAGE電泳齣現一條32 ku蛋白條帶,與GST-hEGF融閤蛋白的計算分子量相符.菌體裂解液中的可溶性GST-hEGF的產率為63 mg·L-1.將其添加到培養的HEK-293細胞中,能明顯促進該細胞的分裂和生長.結論成功地構建併錶達瞭GST-hEGF融閤蛋白基因,其錶達產物GST-hEGF顯示良好的促細胞增殖活性.
목적통과융합단백적표체사인표피생장인자(hEGF)역우순화.방법구건기우tac계동자적pGEX 4T-1-hEGF원핵표체재체,전화대장간균BL21(DE3),이이병기-1-류대-β-D반유당감유도,표체곡광감태-S-전이매(GST)-hEGF융합단백.결과표체산물점세균총단백적34%.부분위가용성적,부분형성포함체.균체렬해상청액경Glutathione Sepharose 4B순화후,SDS-PAGE전영출현일조32 ku단백조대,여GST-hEGF융합단백적계산분자량상부.균체렬해액중적가용성GST-hEGF적산솔위63 mg·L-1.장기첨가도배양적HEK-293세포중,능명현촉진해세포적분렬화생장.결론성공지구건병표체료GST-hEGF융합단백기인,기표체산물GST-hEGF현시량호적촉세포증식활성.
