中国首次分离的辛德毕斯病毒XJ-160病毒株感染性全基因组cDNA克隆的构建与分析
중국수차분리적신덕필사병독XJ-160병독주감염성전기인조cDNA극륭적구건여분석
Construction and Infection Analysis of the Full-length cDNA Clone of XJ-160 Virus, the First Sindbis Virus Isolated in China
  • 万方数据
    病毒学报 병독학보
    CHINESE JOURNAL OF VIROLOGY
    2005年 3期 173-180 ,共8页

    杨益良%梁国栋%付士红%何海怀%李晓宇%邓娟%苏乃伦%王力华%侯云德

    양익량%량국동%부사홍%하해부%리효우%산연%소내륜%왕력화%후운덕

    感染性cDNA克隆%恢复病毒%辛德毕斯病毒%XJ-160病毒株 感染性cDNA剋隆%恢複病毒%辛德畢斯病毒%XJ-160病毒株
    감염성cDNA극륭%회복병독%신덕필사병독%XJ-160병독주
    报告了中国首次分离的辛德毕斯病毒XJ-160株的感染性全基因组cDNA克隆的构建与鉴定.利用RT-PCR方法获得覆盖病毒全长基因组的cDNA片段,以低拷贝质粒pBR322作为骨架,将基因组cDNA置于SP6 RNA聚合酶启动子之后,基因组3'末端带有35个连续的A,通过DNA重组技术组装成病毒基因组全长cDNA克隆.该克隆可在大肠杆菌DH5a中稳定扩增.经体外转录,RNA转录体转染BHK-21细胞,细胞发生病变,恢复病毒滴度达到107～108pFU/ml.全基因组cDNA克隆构建过程中引入的沉默突变(8 453位核苷酸由C变为T)产生Xba Ⅰ酶切位点作为遗传标记,在子代恢复病毒的基因组中稳定存在.从细胞病变的特征、BHK-21细胞的空斑形态、病毒的抗原性、病毒在细胞中的生长动力学特征以及对乳鼠的致病性等方面比较,恢复病毒和亲本病毒XJ-160没有显著区别,提示获得了具有感染性的XJ-160病毒全长cDNA克隆.该病毒感染性全基因组cDNA克隆可以作为反向遗传学系统,为进一步研究病毒复制和致病机制,以及开发相应的载体表达系统提供分子生物学工具.
    보고료중국수차분리적신덕필사병독XJ-160주적감염성전기인조cDNA극륭적구건여감정.이용RT-PCR방법획득복개병독전장기인조적cDNA편단,이저고패질립pBR322작위골가,장기인조cDNA치우SP6 RNA취합매계동자지후,기인조3'말단대유35개련속적A,통과DNA중조기술조장성병독기인조전장cDNA극륭.해극륭가재대장간균DH5a중은정확증.경체외전록,RNA전록체전염BHK-21세포,세포발생병변,회복병독적도체도107～108pFU/ml.전기인조cDNA극륭구건과정중인입적침묵돌변(8 453위핵감산유C변위T)산생Xba Ⅰ매절위점작위유전표기,재자대회복병독적기인조중은정존재.종세포병변적특정、BHK-21세포적공반형태、병독적항원성、병독재세포중적생장동역학특정이급대유서적치병성등방면비교,회복병독화친본병독XJ-160몰유현저구별,제시획득료구유감염성적XJ-160병독전장cDNA극륭.해병독감염성전기인조cDNA극륭가이작위반향유전학계통,위진일보연구병독복제화치병궤제,이급개발상응적재체표체계통제공분자생물학공구.
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