中国生物制品学杂志
中國生物製品學雜誌
중국생물제품학잡지
CHINESE JOURNAL OF BIOLOGICALS
2005年
4期
273-276
,共4页
吴志聪%张庶民%王一飞%骆鹏%贾天军
吳誌聰%張庶民%王一飛%駱鵬%賈天軍
오지총%장서민%왕일비%락붕%가천군
甘露糖结合凝集素%基因克隆%原核表达
甘露糖結閤凝集素%基因剋隆%原覈錶達
감로당결합응집소%기인극륭%원핵표체
目的克隆中国人MBL基因编码区序列,并在原核细胞中表达.方法提取肝总RNA,RT-PCR扩增MBL编码区序列,并克隆到pGEM-T-easy载体上,再亚克隆到pET-30(a)上.诱导表达重组MBL,并通过SDS-PAGE检测表达情况,表达蛋白经初步纯化后,用ELISA及点杂交试验检测其免疫原性.结果克隆得到长747 bp的MBL编码区序列,与GenBank中的MBL序列同源性在99%以上.重组MBL相对分子质量约为36 000,以包涵体形式存在,表达量占菌体总蛋白量的20%左右,表达蛋白经初步纯化,纯度可达95%以上.ELISA检测显示重组MBL A490值与阴性对照差异有显著意义(10倍以上),点杂交检测结果为阳性.结论已成功克隆中国人MBL基因的编码区序列,并在大肠杆菌中表达,表达产物与天然MBL具有相似的免疫原性.
目的剋隆中國人MBL基因編碼區序列,併在原覈細胞中錶達.方法提取肝總RNA,RT-PCR擴增MBL編碼區序列,併剋隆到pGEM-T-easy載體上,再亞剋隆到pET-30(a)上.誘導錶達重組MBL,併通過SDS-PAGE檢測錶達情況,錶達蛋白經初步純化後,用ELISA及點雜交試驗檢測其免疫原性.結果剋隆得到長747 bp的MBL編碼區序列,與GenBank中的MBL序列同源性在99%以上.重組MBL相對分子質量約為36 000,以包涵體形式存在,錶達量佔菌體總蛋白量的20%左右,錶達蛋白經初步純化,純度可達95%以上.ELISA檢測顯示重組MBL A490值與陰性對照差異有顯著意義(10倍以上),點雜交檢測結果為暘性.結論已成功剋隆中國人MBL基因的編碼區序列,併在大腸桿菌中錶達,錶達產物與天然MBL具有相似的免疫原性.
목적극륭중국인MBL기인편마구서렬,병재원핵세포중표체.방법제취간총RNA,RT-PCR확증MBL편마구서렬,병극륭도pGEM-T-easy재체상,재아극륭도pET-30(a)상.유도표체중조MBL,병통과SDS-PAGE검측표체정황,표체단백경초보순화후,용ELISA급점잡교시험검측기면역원성.결과극륭득도장747 bp적MBL편마구서렬,여GenBank중적MBL서렬동원성재99%이상.중조MBL상대분자질량약위36 000,이포함체형식존재,표체량점균체총단백량적20%좌우,표체단백경초보순화,순도가체95%이상.ELISA검측현시중조MBL A490치여음성대조차이유현저의의(10배이상),점잡교검측결과위양성.결론이성공극륭중국인MBL기인적편마구서렬,병재대장간균중표체,표체산물여천연MBL구유상사적면역원성.
