微生物学报
微生物學報
미생물학보
ACTA MICROBIOLOGICA SINICA
2006年
3期
353-357
,共5页
师永霞%曾少灵%袁美妗%孙钒%庞义
師永霞%曾少靈%袁美妗%孫釩%龐義
사영하%증소령%원미금%손범%방의
苏云金杆菌%辅助蛋白P19%晶体蛋白Cry11Aa%生物测定
囌雲金桿菌%輔助蛋白P19%晶體蛋白Cry11Aa%生物測定
소운금간균%보조단백P19%정체단백Cry11Aa%생물측정
苏云金杆菌以色列亚种的p19基因、cry11Aa基因和p20基因位于同一操纵子上,据推测辅助蛋白P19可能与Cry11Aa蛋白的晶体化相关.本研究利用穿梭载体pHT3101构建了两个重组质粒pHcy1和pHcy3,两质粒均携带cry11Aa基因,但后者完全缺失了cry11Aa基因上游的p19基因.将重组质粒电激转化至苏云金杆菌无晶体突变株4Q7中进行蛋白表达,SDS-PAGE结果表明在4Q7(pHcy1)和4Q7(pHcy3)中均能检测到正常表达的Cry11Aa蛋白,但单位体积培养液的Cry11Aa蛋白在辅助蛋白P19存在时的表达量明显高于其单独表达的表达量;透射电镜观察显示两菌株中的Cry11Aa蛋白形成了大小相近、形状相似的双梯形晶体;另外,生物测定结果表明重组菌株4Q7(pHcy1)和4Q7(pHcy3)对三龄致倦库蚊的杀虫活性没有显著性差异.该现象说明辅助蛋白P19的缺失对Cry11Aa蛋白的晶体形成和杀蚊活性没有影响,但P19作为分子伴侣在一定程度上帮助提高了Cry11Aa蛋白的表达水平.
囌雲金桿菌以色列亞種的p19基因、cry11Aa基因和p20基因位于同一操縱子上,據推測輔助蛋白P19可能與Cry11Aa蛋白的晶體化相關.本研究利用穿梭載體pHT3101構建瞭兩箇重組質粒pHcy1和pHcy3,兩質粒均攜帶cry11Aa基因,但後者完全缺失瞭cry11Aa基因上遊的p19基因.將重組質粒電激轉化至囌雲金桿菌無晶體突變株4Q7中進行蛋白錶達,SDS-PAGE結果錶明在4Q7(pHcy1)和4Q7(pHcy3)中均能檢測到正常錶達的Cry11Aa蛋白,但單位體積培養液的Cry11Aa蛋白在輔助蛋白P19存在時的錶達量明顯高于其單獨錶達的錶達量;透射電鏡觀察顯示兩菌株中的Cry11Aa蛋白形成瞭大小相近、形狀相似的雙梯形晶體;另外,生物測定結果錶明重組菌株4Q7(pHcy1)和4Q7(pHcy3)對三齡緻倦庫蚊的殺蟲活性沒有顯著性差異.該現象說明輔助蛋白P19的缺失對Cry11Aa蛋白的晶體形成和殺蚊活性沒有影響,但P19作為分子伴侶在一定程度上幫助提高瞭Cry11Aa蛋白的錶達水平.
소운금간균이색렬아충적p19기인、cry11Aa기인화p20기인위우동일조종자상,거추측보조단백P19가능여Cry11Aa단백적정체화상관.본연구이용천사재체pHT3101구건료량개중조질립pHcy1화pHcy3,량질립균휴대cry11Aa기인,단후자완전결실료cry11Aa기인상유적p19기인.장중조질립전격전화지소운금간균무정체돌변주4Q7중진행단백표체,SDS-PAGE결과표명재4Q7(pHcy1)화4Q7(pHcy3)중균능검측도정상표체적Cry11Aa단백,단단위체적배양액적Cry11Aa단백재보조단백P19존재시적표체량명현고우기단독표체적표체량;투사전경관찰현시량균주중적Cry11Aa단백형성료대소상근、형상상사적쌍제형정체;령외,생물측정결과표명중조균주4Q7(pHcy1)화4Q7(pHcy3)대삼령치권고문적살충활성몰유현저성차이.해현상설명보조단백P19적결실대Cry11Aa단백적정체형성화살문활성몰유영향,단P19작위분자반려재일정정도상방조제고료Cry11Aa단백적표체수평.
