中国预防兽医学报
中國預防獸醫學報
중국예방수의학보
CHINESE JOURNAL OF PREVENTIVE VETERINARY MEDICINE
2007年
5期
346-349,358
,共5页
姚清侠%钱平%曹毅%郭东春%徐卓菲%何雁南%司有辉%陈焕春
姚清俠%錢平%曹毅%郭東春%徐卓菲%何雁南%司有輝%陳煥春
요청협%전평%조의%곽동춘%서탁비%하안남%사유휘%진환춘
口蹄疫病毒%抗原表位%猪γ-干扰素%融合表达
口蹄疫病毒%抗原錶位%豬γ-榦擾素%融閤錶達
구제역병독%항원표위%저γ-간우소%융합표체
将人工合成的口蹄疫病毒VP1-3上的抗原表位基因和猪γ-干扰素基因串联入原核表达载体pGEx-KG中,经酶切鉴定及测序表明重组载体中二者以接头融合的形式构建成重组表达质粒.将该质粒转化BL21后经IPTG诱导,实现了重组融合蛋白的高效表达,表达产物经SDS-PAGE和Western blot分析,重组蛋白分子量约为66 Ku,与预期大小相符.薄层扫描分析显示表达的重组蛋白占菌体总蛋白的37.4%,且主要以包涵体的形式存在.包涵体以SKL变性后,经PEG4000、氧化型谷胱苷肽和还原型谷胱苷肽复性.粗提产物以CPE50测得重组蛋白在MDBK细胞上的抗水泡性口炎病毒(Vesicular stomatitis virus,VSV)的活性达到1 600 U/mL,说明表达产物具有干扰素的生物学活性,为下一步基因工程疫苗的研究奠定了基础.
將人工閤成的口蹄疫病毒VP1-3上的抗原錶位基因和豬γ-榦擾素基因串聯入原覈錶達載體pGEx-KG中,經酶切鑒定及測序錶明重組載體中二者以接頭融閤的形式構建成重組錶達質粒.將該質粒轉化BL21後經IPTG誘導,實現瞭重組融閤蛋白的高效錶達,錶達產物經SDS-PAGE和Western blot分析,重組蛋白分子量約為66 Ku,與預期大小相符.薄層掃描分析顯示錶達的重組蛋白佔菌體總蛋白的37.4%,且主要以包涵體的形式存在.包涵體以SKL變性後,經PEG4000、氧化型穀胱苷肽和還原型穀胱苷肽複性.粗提產物以CPE50測得重組蛋白在MDBK細胞上的抗水泡性口炎病毒(Vesicular stomatitis virus,VSV)的活性達到1 600 U/mL,說明錶達產物具有榦擾素的生物學活性,為下一步基因工程疫苗的研究奠定瞭基礎.
장인공합성적구제역병독VP1-3상적항원표위기인화저γ-간우소기인천련입원핵표체재체pGEx-KG중,경매절감정급측서표명중조재체중이자이접두융합적형식구건성중조표체질립.장해질립전화BL21후경IPTG유도,실현료중조융합단백적고효표체,표체산물경SDS-PAGE화Western blot분석,중조단백분자량약위66 Ku,여예기대소상부.박층소묘분석현시표체적중조단백점균체총단백적37.4%,차주요이포함체적형식존재.포함체이SKL변성후,경PEG4000、양화형곡광감태화환원형곡광감태복성.조제산물이CPE50측득중조단백재MDBK세포상적항수포성구염병독(Vesicular stomatitis virus,VSV)적활성체도1 600 U/mL,설명표체산물구유간우소적생물학활성,위하일보기인공정역묘적연구전정료기출.
