中国畜牧兽医
中國畜牧獸醫
중국축목수의
CHINA ANIMAL HUSBANDRY & VETERINARY MEDICINE
2008年
4期
26-30
,共5页
刘玉堂%胡晓航%闫丽辉%曹殿军%刘培欣%杨传平
劉玉堂%鬍曉航%閆麗輝%曹殿軍%劉培訢%楊傳平
류옥당%호효항%염려휘%조전군%류배흔%양전평
银狐%生长激素%克隆%原核表达
銀狐%生長激素%剋隆%原覈錶達
은호%생장격소%극륭%원핵표체
为了获得重组的银狐生长激素,本试验用Trizol的方法从银狐脑垂体组织中提取总RNA,以mRNA为模板,用RT-PCR方法扩增出生长激素成熟cDNA片段并克隆到载体质粒pMD18-T中;通过含有BamH Ⅰ酶切位点的特异引物从pMD18-T-fGH中亚克隆出cDNA片段,并将其重组到pPROECTM Hta质粒中,构建了银狐生长激素原核表达质粒pPRO-EXTMHta-fGH.将pPROEXTM Hta-fGH原核表达质粒转化DH5α大肠杆菌,用终浓度1 mmol/L IPTG进行诱导,通过SDSPAGE进行检测.结果表明在转化的大肠杆菌中检测到分子量为26 kD的fGH蛋白的存在,表达量占菌体蛋白总量的35%,并且表达产物以包涵体的形式存在.
為瞭穫得重組的銀狐生長激素,本試驗用Trizol的方法從銀狐腦垂體組織中提取總RNA,以mRNA為模闆,用RT-PCR方法擴增齣生長激素成熟cDNA片段併剋隆到載體質粒pMD18-T中;通過含有BamH Ⅰ酶切位點的特異引物從pMD18-T-fGH中亞剋隆齣cDNA片段,併將其重組到pPROECTM Hta質粒中,構建瞭銀狐生長激素原覈錶達質粒pPRO-EXTMHta-fGH.將pPROEXTM Hta-fGH原覈錶達質粒轉化DH5α大腸桿菌,用終濃度1 mmol/L IPTG進行誘導,通過SDSPAGE進行檢測.結果錶明在轉化的大腸桿菌中檢測到分子量為26 kD的fGH蛋白的存在,錶達量佔菌體蛋白總量的35%,併且錶達產物以包涵體的形式存在.
위료획득중조적은호생장격소,본시험용Trizol적방법종은호뇌수체조직중제취총RNA,이mRNA위모판,용RT-PCR방법확증출생장격소성숙cDNA편단병극륭도재체질립pMD18-T중;통과함유BamH Ⅰ매절위점적특이인물종pMD18-T-fGH중아극륭출cDNA편단,병장기중조도pPROECTM Hta질립중,구건료은호생장격소원핵표체질립pPRO-EXTMHta-fGH.장pPROEXTM Hta-fGH원핵표체질립전화DH5α대장간균,용종농도1 mmol/L IPTG진행유도,통과SDSPAGE진행검측.결과표명재전화적대장간균중검측도분자량위26 kD적fGH단백적존재,표체량점균체단백총량적35%,병차표체산물이포함체적형식존재.
