东南大学学报（医学版）
東南大學學報（醫學版）
동남대학학보（의학판）
JOURNAL OF SOUTHEAST UNIVERSITY(MEDICAL SCIENCE EDITION)
2010年
4期
361-366
,共6页
范小波%苟丽霞%刘昭%沈子龙%刘乃丰%吴国球%奚涛
範小波%茍麗霞%劉昭%瀋子龍%劉迺豐%吳國毬%奚濤
범소파%구려하%류소%침자룡%류내봉%오국구%해도
人源单链抗体%结缔组织生长因子%弹性蛋白%分离纯化
人源單鏈抗體%結締組織生長因子%彈性蛋白%分離純化
인원단련항체%결체조직생장인자%탄성단백%분리순화
目的:研究单链抗体(scFv)在不同载体和菌株中的表达以及表达产物的免疫学活性评价.方法:将人源化单链抗体的基因通过酶切、连接等生物技术的方法克隆到pET28a、pET32a和pET-EI:X 3种不同的载体中,并选用不同的表达菌株进行表达,观察单链抗体的表达情况并对抗体的可溶性表达进行优化,采用亲和层析和分子筛层析对目的蛋白进行纯化,并在体外研究目的蛋白的生物学活性.结果:抗结缔组织生长因子单链抗体在pET28a/BL21(DE3)中不能表达,在pET32a/BL21(DE3)和pET-EI:X/BLR(DE3)中均成功表达,但是在pET-EI:X/BLR(DE3)中scFv抗体无法从内含肽(intein)上裂解.scFv在pET32a/BL21(DE3)中表达量占总蛋白的30%左右,经过两步层析纯化后纯度达到85%以上.体外免疫试验显示,目的蛋白具有良好的免疫学活性.结论:人源化抗结缔组织生长因子单链抗体scFv在大肠杆菌中的表达需要分子伴侣,通过低温表达策略在pET32a/BL21(DE3)中成功得到表达.
目的:研究單鏈抗體(scFv)在不同載體和菌株中的錶達以及錶達產物的免疫學活性評價.方法:將人源化單鏈抗體的基因通過酶切、連接等生物技術的方法剋隆到pET28a、pET32a和pET-EI:X 3種不同的載體中,併選用不同的錶達菌株進行錶達,觀察單鏈抗體的錶達情況併對抗體的可溶性錶達進行優化,採用親和層析和分子篩層析對目的蛋白進行純化,併在體外研究目的蛋白的生物學活性.結果:抗結締組織生長因子單鏈抗體在pET28a/BL21(DE3)中不能錶達,在pET32a/BL21(DE3)和pET-EI:X/BLR(DE3)中均成功錶達,但是在pET-EI:X/BLR(DE3)中scFv抗體無法從內含肽(intein)上裂解.scFv在pET32a/BL21(DE3)中錶達量佔總蛋白的30%左右,經過兩步層析純化後純度達到85%以上.體外免疫試驗顯示,目的蛋白具有良好的免疫學活性.結論:人源化抗結締組織生長因子單鏈抗體scFv在大腸桿菌中的錶達需要分子伴侶,通過低溫錶達策略在pET32a/BL21(DE3)中成功得到錶達.
목적:연구단련항체(scFv)재불동재체화균주중적표체이급표체산물적면역학활성평개.방법:장인원화단련항체적기인통과매절、련접등생물기술적방법극륭도pET28a、pET32a화pET-EI:X 3충불동적재체중,병선용불동적표체균주진행표체,관찰단련항체적표체정황병대항체적가용성표체진행우화,채용친화층석화분자사층석대목적단백진행순화,병재체외연구목적단백적생물학활성.결과:항결체조직생장인자단련항체재pET28a/BL21(DE3)중불능표체,재pET32a/BL21(DE3)화pET-EI:X/BLR(DE3)중균성공표체,단시재pET-EI:X/BLR(DE3)중scFv항체무법종내함태(intein)상렬해.scFv재pET32a/BL21(DE3)중표체량점총단백적30%좌우,경과량보층석순화후순도체도85%이상.체외면역시험현시,목적단백구유량호적면역학활성.결론:인원화항결체조직생장인자단련항체scFv재대장간균중적표체수요분자반려,통과저온표체책략재pET32a/BL21(DE3)중성공득도표체.
