生物技术通报
生物技術通報
생물기술통보
BIOTECHNOLOGY BULLETIN
2011年
12期
75-81
,共7页
单曙光%于国红%徐娜%程宪国
單曙光%于國紅%徐娜%程憲國
단서광%우국홍%서나%정헌국
GmC2H2%锌指蛋白%转基因拟南芥%GUS检测%Real-time qPCR
GmC2H2%鋅指蛋白%轉基因擬南芥%GUS檢測%Real-time qPCR
GmC2H2%자지단백%전기인의남개%GUS검측%Real-time qPCR
GmC2H2转录因子基因是本实验室获得的一个编码172个氨基酸携带516bp核苷酸的转录因子,属于经典C2H2型锌指蛋白.通过构建植物表达载体GmC2H2-pCAMBIA1304,借助优化的Floral-dip法转化模式植物拟南芥,经潮霉素Hygromycine( 45-50 mg/L)抗性筛选获得转基因拟南芥植株.GUS组织染色分析表明,GmC2H2基因在生长12d的转基因拟南芥幼苗中,表达部位主要集中在根部.对转基因拟南芥进行了低温(1℃)和脱落酸(200 μmol/L)胁迫处理,测定其生理生化指标,通过real-time qPCR确定目的基因在转基因拟南芥中的表达情况.结果表明,携带GmC2H2目的基因的转基因拟南芥中脯氨酸和可溶性糖水平要高于野生型植株,而丙二醛水平要低于野生型,在抗逆性方面明显优于野生型拟南芥植株;并且胁迫处理下的转基因拟南芥中GmC2H2基因的表达量要高于未胁迫处理的转基因植株,说明GmC2H2基因的表达受低温和ABA的诱导,初步明确了该转录因子基因的功能.
GmC2H2轉錄因子基因是本實驗室穫得的一箇編碼172箇氨基痠攜帶516bp覈苷痠的轉錄因子,屬于經典C2H2型鋅指蛋白.通過構建植物錶達載體GmC2H2-pCAMBIA1304,藉助優化的Floral-dip法轉化模式植物擬南芥,經潮黴素Hygromycine( 45-50 mg/L)抗性篩選穫得轉基因擬南芥植株.GUS組織染色分析錶明,GmC2H2基因在生長12d的轉基因擬南芥幼苗中,錶達部位主要集中在根部.對轉基因擬南芥進行瞭低溫(1℃)和脫落痠(200 μmol/L)脅迫處理,測定其生理生化指標,通過real-time qPCR確定目的基因在轉基因擬南芥中的錶達情況.結果錶明,攜帶GmC2H2目的基因的轉基因擬南芥中脯氨痠和可溶性糖水平要高于野生型植株,而丙二醛水平要低于野生型,在抗逆性方麵明顯優于野生型擬南芥植株;併且脅迫處理下的轉基因擬南芥中GmC2H2基因的錶達量要高于未脅迫處理的轉基因植株,說明GmC2H2基因的錶達受低溫和ABA的誘導,初步明確瞭該轉錄因子基因的功能.
GmC2H2전록인자기인시본실험실획득적일개편마172개안기산휴대516bp핵감산적전록인자,속우경전C2H2형자지단백.통과구건식물표체재체GmC2H2-pCAMBIA1304,차조우화적Floral-dip법전화모식식물의남개,경조매소Hygromycine( 45-50 mg/L)항성사선획득전기인의남개식주.GUS조직염색분석표명,GmC2H2기인재생장12d적전기인의남개유묘중,표체부위주요집중재근부.대전기인의남개진행료저온(1℃)화탈락산(200 μmol/L)협박처리,측정기생리생화지표,통과real-time qPCR학정목적기인재전기인의남개중적표체정황.결과표명,휴대GmC2H2목적기인적전기인의남개중포안산화가용성당수평요고우야생형식주,이병이철수평요저우야생형,재항역성방면명현우우야생형의남개식주;병차협박처리하적전기인의남개중GmC2H2기인적표체량요고우미협박처리적전기인식주,설명GmC2H2기인적표체수저온화ABA적유도,초보명학료해전록인자기인적공능.