CAJ | 학술논문

作者从蜡样芽孢杆菌F1-5-10中提取DNA,通过PCR克隆得到褐藻胶裂解酶基因后,将其构建到pET-30a(+)上并在大肠杆菌BL21菌株中进行高效诱导表达,继而对纯化得到的褐藻胶裂解酶蛋白进行活性检测和酶学特性研究.实验结果表明:PCR扩增出1035 bp大小的褐藻胶裂解酶基因algl(GenBank登录号:GU585575),SDS-PAGE电泳结果显示出相对分子质量约为45 000的特异性蛋白质条带.表达条件优化实验结果表明0.4 mmol/L浓度的IPTG 32℃诱导4h重组蛋白的表达量最高,约占菌体总蛋白质质量的36％.测定褐藻胶裂解酶酶活性,酶活力为11.7 U/mg.酶学性质研究表明:ALGL的酶活最适温度为35℃,热稳定性较差,最适pH值为6.6,Ca2+、Mg2对酶活有激活作用,ALGL催化褐藻胶的Km值为1.89 mg/mL,Vmax为15.01 U/mL.
작자종사양아포간균F1-5-10중제취DNA,통과PCR극륭득도갈조효렬해매기인후,장기구건도pET-30a(+)상병재대장간균BL21균주중진행고효유도표체,계이대순화득도적갈조효렬해매단백진행활성검측화매학특성연구.실험결과표명:PCR확증출1035 bp대소적갈조효렬해매기인algl(GenBank등록호:GU585575),SDS-PAGE전영결과현시출상대분자질량약위45 000적특이성단백질조대.표체조건우화실험결과표명0.4 mmol/L농도적IPTG 32℃유도4h중조단백적표체량최고,약점균체총단백질질량적36％.측정갈조효렬해매매활성,매활력위11.7 U/mg.매학성질연구표명:ALGL적매활최괄온도위35℃,열은정성교차,최괄pH치위6.6,Ca2+、Mg2대매활유격활작용,ALGL최화갈조효적Km치위1.89 mg/mL,Vmax위15.01 U/mL.