实用医技杂志
實用醫技雜誌
실용의기잡지
JOURNAL OF PRACTICAL MEDICAL TECHNIQUES
2012年
8期
791-793
,共3页
林少芬%毛羽翔%郑健樑%梁胡洁%唐仕波
林少芬%毛羽翔%鄭健樑%樑鬍潔%唐仕波
림소분%모우상%정건량%량호길%당사파
色素上皮,眼%细胞培养技术%低温保存%复苏术
色素上皮,眼%細胞培養技術%低溫保存%複囌術
색소상피,안%세포배양기술%저온보존%복소술
目的 优化建立一种简单有效的人视网膜色素上皮细胞(RPE)的原代培养、冻存和复苏的方法,对细胞进行鉴定,为研究RPE 的功能和治疗有关眼病提供细胞来源.方法 采用0.25%胰酶+0.02%乙二胺四乙酸(EDTA)二次消化分离细胞并进行传代,以0.125%胰酶进行传代,用免疫组织化学检测进行角蛋白与S100 表达鉴定RPE.利用-80 ℃冰箱对细胞冻存,复苏后观察细胞活性.结果 RPE 体外生长旺盛、1 h 贴壁.初期为圆型,胞壁内充满黑色色素,传代后细胞呈圆型、不规则形,细胞透亮.免疫组织化学角蛋白与S100 均呈强阳性,证实培养的是RPE 细胞,所获细胞纯度100%.冻存细胞复苏后生长旺盛,细胞形态与复苏前相比无区别.结论 二次胰蛋白酶消化分离细胞数量多,能成功建立RPE 的体外培养模式,用-80 ℃冻存RPE 的方法简便,成本低,冻存复苏后细胞存活率及细胞形态不受影响,是目前较理想的RPE 细胞保存方法.
目的 優化建立一種簡單有效的人視網膜色素上皮細胞(RPE)的原代培養、凍存和複囌的方法,對細胞進行鑒定,為研究RPE 的功能和治療有關眼病提供細胞來源.方法 採用0.25%胰酶+0.02%乙二胺四乙痠(EDTA)二次消化分離細胞併進行傳代,以0.125%胰酶進行傳代,用免疫組織化學檢測進行角蛋白與S100 錶達鑒定RPE.利用-80 ℃冰箱對細胞凍存,複囌後觀察細胞活性.結果 RPE 體外生長旺盛、1 h 貼壁.初期為圓型,胞壁內充滿黑色色素,傳代後細胞呈圓型、不規則形,細胞透亮.免疫組織化學角蛋白與S100 均呈彊暘性,證實培養的是RPE 細胞,所穫細胞純度100%.凍存細胞複囌後生長旺盛,細胞形態與複囌前相比無區彆.結論 二次胰蛋白酶消化分離細胞數量多,能成功建立RPE 的體外培養模式,用-80 ℃凍存RPE 的方法簡便,成本低,凍存複囌後細胞存活率及細胞形態不受影響,是目前較理想的RPE 細胞保存方法.
목적 우화건립일충간단유효적인시망막색소상피세포(RPE)적원대배양、동존화복소적방법,대세포진행감정,위연구RPE 적공능화치료유관안병제공세포래원.방법 채용0.25%이매+0.02%을이알사을산(EDTA)이차소화분리세포병진행전대,이0.125%이매진행전대,용면역조직화학검측진행각단백여S100 표체감정RPE.이용-80 ℃빙상대세포동존,복소후관찰세포활성.결과 RPE 체외생장왕성、1 h 첩벽.초기위원형,포벽내충만흑색색소,전대후세포정원형、불규칙형,세포투량.면역조직화학각단백여S100 균정강양성,증실배양적시RPE 세포,소획세포순도100%.동존세포복소후생장왕성,세포형태여복소전상비무구별.결론 이차이단백매소화분리세포수량다,능성공건립RPE 적체외배양모식,용-80 ℃동존RPE 적방법간편,성본저,동존복소후세포존활솔급세포형태불수영향,시목전교이상적RPE 세포보존방법.
