山东科学
山東科學
산동과학
SHANDONG SCIENCE
2006年
1期
23-27
,共5页
崔海涛%李春霞%王红艳%陈红运%竺晓平%时呈奎%李向东
崔海濤%李春霞%王紅豔%陳紅運%竺曉平%時呈奎%李嚮東
최해도%리춘하%왕홍염%진홍운%축효평%시정규%리향동
本生烟%组织培养%MS培养基%实时荧光PCR
本生煙%組織培養%MS培養基%實時熒光PCR
본생연%조직배양%MS배양기%실시형광PCR
本文研究了通过农杆菌侵染获得本生烟(Nicotiana benthamiana)转基因植株的方法.将本生烟中上部叶片消毒后切成5mm×5mm左右的小块作为外植体,在含有6-BA(3mg/L)和NAA(0.2mg/L)的MS培养基中培养2～3d,用含有表达载体的农杆菌侵染后共培养3～4d,转入含有6-BA(3mg/L)、NAA(0.2mg/L)和卡那霉素(100mg/L)的MS培养基中培养2～3周.将外植体边缘产生的愈伤组织和芽点转移到只含有卡那霉素(100mg/L)的MS培养基中继续培养,2周后分化出大量不定芽.继续培养2周,当芽长1～3cm时,将芽转移到含IBA(0.1mg/L)的MS培养基中分化生根,得到再生植株.当再生植株高8～10cm、根长4～5cm以上时,移栽到经过灭菌的营养土中.通过实时荧光PCR扩增,从获得的植株中检测35S启动子和NOS终止子外源基因片段,判定所得的植株的确为转基因植株.最后对本生烟组织培养中应该注意的问题进行了讨论.
本文研究瞭通過農桿菌侵染穫得本生煙(Nicotiana benthamiana)轉基因植株的方法.將本生煙中上部葉片消毒後切成5mm×5mm左右的小塊作為外植體,在含有6-BA(3mg/L)和NAA(0.2mg/L)的MS培養基中培養2～3d,用含有錶達載體的農桿菌侵染後共培養3～4d,轉入含有6-BA(3mg/L)、NAA(0.2mg/L)和卡那黴素(100mg/L)的MS培養基中培養2～3週.將外植體邊緣產生的愈傷組織和芽點轉移到隻含有卡那黴素(100mg/L)的MS培養基中繼續培養,2週後分化齣大量不定芽.繼續培養2週,噹芽長1～3cm時,將芽轉移到含IBA(0.1mg/L)的MS培養基中分化生根,得到再生植株.噹再生植株高8～10cm、根長4～5cm以上時,移栽到經過滅菌的營養土中.通過實時熒光PCR擴增,從穫得的植株中檢測35S啟動子和NOS終止子外源基因片段,判定所得的植株的確為轉基因植株.最後對本生煙組織培養中應該註意的問題進行瞭討論.
본문연구료통과농간균침염획득본생연(Nicotiana benthamiana)전기인식주적방법.장본생연중상부협편소독후절성5mm×5mm좌우적소괴작위외식체,재함유6-BA(3mg/L)화NAA(0.2mg/L)적MS배양기중배양2～3d,용함유표체재체적농간균침염후공배양3～4d,전입함유6-BA(3mg/L)、NAA(0.2mg/L)화잡나매소(100mg/L)적MS배양기중배양2～3주.장외식체변연산생적유상조직화아점전이도지함유잡나매소(100mg/L)적MS배양기중계속배양,2주후분화출대량불정아.계속배양2주,당아장1～3cm시,장아전이도함IBA(0.1mg/L)적MS배양기중분화생근,득도재생식주.당재생식주고8～10cm、근장4～5cm이상시,이재도경과멸균적영양토중.통과실시형광PCR확증,종획득적식주중검측35S계동자화NOS종지자외원기인편단,판정소득적식주적학위전기인식주.최후대본생연조직배양중응해주의적문제진행료토론.
