CAJ | 학술논문

目的:重组表达并纯化抗β淀粉样肽40的人单链抗体,为被动免疫治疗阿尔茨海默疾病提供研究材料.方法:实验于2004-08/2005-03在核医学实验室完成.自制人单链抗体基因.将从人噬菌体单链抗体文库中筛选获得的抗β淀粉样肽40人单链抗体基因,克隆到pET22b(+)质粒,转化BL21-gold大肠杆菌,经0.5 mmol/L异丙基硫代-β-D半乳糖苷诱导表达抗β淀粉样肽40的人单链抗体.采用Ni2+-NTA-树脂柱亲和纯化尿素变性的包涵体内表达产物,经柱上复性,含咪唑缓冲液洗脱获得人单链抗体.应用western blot和酶联免疫吸附实验鉴定纯化的抗β淀粉样肽40的人单链抗体.用Branford法测定纯化抗体的浓度.结果:①抗β淀粉样肽40人单链抗体基因长度约为750 bp,重组表达产物相对分子质量33 000.②经过一次亲和柱纯化,从细菌包涵体中纯化出高纯度的抗β淀粉样肽40人单链抗体.③酶联免疫吸附实验分析表明纯化单链抗体和β淀粉样肽40结合的A595nm高于对照,差异显著(0.59±0.06,0.12±0.02,P＜0.05),表明从包涵体中纯化出来β淀粉样肽40人单链抗体保持了结合抗原的免疫活性.纯化β淀粉样肽40人单链抗体浓度为96 mg/L.结论:抗β淀粉样肽40的人单链抗体在大肠杆菌系统得以重组表达,利用亲和层析成功获得高纯度的重组单链抗体.
목적:중조표체병순화항β정분양태40적인단련항체,위피동면역치료아이자해묵질병제공연구재료.방법:실험우2004-08/2005-03재핵의학실험실완성.자제인단련항체기인.장종인서균체단련항체문고중사선획득적항β정분양태40인단련항체기인,극륭도pET22b(+)질립,전화BL21-gold대장간균,경0.5 mmol/L이병기류대-β-D반유당감유도표체항β정분양태40적인단련항체.채용Ni2+-NTA-수지주친화순화뇨소변성적포함체내표체산물,경주상복성,함미서완충액세탈획득인단련항체.응용western blot화매련면역흡부실험감정순화적항β정분양태40적인단련항체.용Branford법측정순화항체적농도.결과:①항β정분양태40인단련항체기인장도약위750 bp,중조표체산물상대분자질량33 000.②경과일차친화주순화,종세균포함체중순화출고순도적항β정분양태40인단련항체.③매련면역흡부실험분석표명순화단련항체화β정분양태40결합적A595nm고우대조,차이현저(0.59±0.06,0.12±0.02,P＜0.05),표명종포함체중순화출래β정분양태40인단련항체보지료결합항원적면역활성.순화β정분양태40인단련항체농도위96 mg/L.결론:항β정분양태40적인단련항체재대장간균계통득이중조표체,이용친화층석성공획득고순도적중조단련항체.