微生物学通报
微生物學通報
미생물학통보
MICROBIOLOGY
2007年
1期
15-18
,共4页
毕赤酵母%甲酸脱氢酶%基因表达%分离纯化
畢赤酵母%甲痠脫氫酶%基因錶達%分離純化
필적효모%갑산탈경매%기인표체%분리순화
用PCR方法从毕赤酵母(Pichia pastoris)基因组DNA扩增甲酸脱氢酶(FDH)基因,通过定点突变密码子TAG(649-651位碱基)为GAG,突变后的基因片段插入表达载体pET-22b(+)构建质粒pET-FDH,转化E.coli BL21(DE3).基因工程菌在IPTG诱导下高效表达可溶性的FDH融合蛋白,蛋白的表达量占基因工程菌株总蛋白的30%.工程菌破壁上清液采用一步亲和层析分离,得到比活力为6.45U/mg的重组FDH.
用PCR方法從畢赤酵母(Pichia pastoris)基因組DNA擴增甲痠脫氫酶(FDH)基因,通過定點突變密碼子TAG(649-651位堿基)為GAG,突變後的基因片段插入錶達載體pET-22b(+)構建質粒pET-FDH,轉化E.coli BL21(DE3).基因工程菌在IPTG誘導下高效錶達可溶性的FDH融閤蛋白,蛋白的錶達量佔基因工程菌株總蛋白的30%.工程菌破壁上清液採用一步親和層析分離,得到比活力為6.45U/mg的重組FDH.
용PCR방법종필적효모(Pichia pastoris)기인조DNA확증갑산탈경매(FDH)기인,통과정점돌변밀마자TAG(649-651위감기)위GAG,돌변후적기인편단삽입표체재체pET-22b(+)구건질립pET-FDH,전화E.coli BL21(DE3).기인공정균재IPTG유도하고효표체가용성적FDH융합단백,단백적표체량점기인공정균주총단백적30%.공정균파벽상청액채용일보친화층석분리,득도비활력위6.45U/mg적중조FDH.
