解剖学报
解剖學報
해부학보
ACTA ANATOMICA SINICA
2007年
5期
610-613
,共4页
皮肤%干细胞%免疫细胞化学%基因转染%大鼠
皮膚%榦細胞%免疫細胞化學%基因轉染%大鼠
피부%간세포%면역세포화학%기인전염%대서
目的 对表皮干细胞(ESCs)进行分离培养和鉴定,利用携带绿色荧光蛋白(eGFP)基因的重组腺相关病毒(rAAV)转染表皮干细胞,探索不同滴度rAAV2/eGFP的转染效率.方法 1.获取胎鼠表皮单细胞悬液.2.利用层黏连蛋白(laminin)和Ⅳ型胶原(Collagen Ⅳ)筛选ESCs,在体外进行培养和鉴定.3.将ESCs按5×104个/孔接种入24孔培养板中,按照不同的病毒基因数与转染细胞数之比(MOI)加入所需rAAV2/eGFP病毒,计数绿色荧光细胞数目,并计算转染效率. 结果 1.ESCs对Laminin和Collagen Ⅳ的吸附性很好,克隆形成率较高.2.对ESCs进行β1整合素(Integrinβ1)单抗、角蛋白19(Keration 19,K19)单抗的免疫细胞化学染色,均呈阳性表达.3.利用rAAV1eGFP病毒体外转染ESCs,可稳定表达eGFP.结论 用Laminin和Collagen Ⅳ快速黏附法可从胎鼠皮肤分离和富集ESCs.
目的 對錶皮榦細胞(ESCs)進行分離培養和鑒定,利用攜帶綠色熒光蛋白(eGFP)基因的重組腺相關病毒(rAAV)轉染錶皮榦細胞,探索不同滴度rAAV2/eGFP的轉染效率.方法 1.穫取胎鼠錶皮單細胞懸液.2.利用層黏連蛋白(laminin)和Ⅳ型膠原(Collagen Ⅳ)篩選ESCs,在體外進行培養和鑒定.3.將ESCs按5×104箇/孔接種入24孔培養闆中,按照不同的病毒基因數與轉染細胞數之比(MOI)加入所需rAAV2/eGFP病毒,計數綠色熒光細胞數目,併計算轉染效率. 結果 1.ESCs對Laminin和Collagen Ⅳ的吸附性很好,剋隆形成率較高.2.對ESCs進行β1整閤素(Integrinβ1)單抗、角蛋白19(Keration 19,K19)單抗的免疫細胞化學染色,均呈暘性錶達.3.利用rAAV1eGFP病毒體外轉染ESCs,可穩定錶達eGFP.結論 用Laminin和Collagen Ⅳ快速黏附法可從胎鼠皮膚分離和富集ESCs.
목적 대표피간세포(ESCs)진행분리배양화감정,이용휴대록색형광단백(eGFP)기인적중조선상관병독(rAAV)전염표피간세포,탐색불동적도rAAV2/eGFP적전염효솔.방법 1.획취태서표피단세포현액.2.이용층점련단백(laminin)화Ⅳ형효원(Collagen Ⅳ)사선ESCs,재체외진행배양화감정.3.장ESCs안5×104개/공접충입24공배양판중,안조불동적병독기인수여전염세포수지비(MOI)가입소수rAAV2/eGFP병독,계수록색형광세포수목,병계산전염효솔. 결과 1.ESCs대Laminin화Collagen Ⅳ적흡부성흔호,극륭형성솔교고.2.대ESCs진행β1정합소(Integrinβ1)단항、각단백19(Keration 19,K19)단항적면역세포화학염색,균정양성표체.3.이용rAAV1eGFP병독체외전염ESCs,가은정표체eGFP.결론 용Laminin화Collagen Ⅳ쾌속점부법가종태서피부분리화부집ESCs.
