细胞与分子免疫学杂志
細胞與分子免疫學雜誌
세포여분자면역학잡지
2008年
12期
1164-1166,1173
,共4页
石学香%高美华%李先平%张蓓%王秋波
石學香%高美華%李先平%張蓓%王鞦波
석학향%고미화%리선평%장배%왕추파
shRNA%CD59%A2780%补体
shRNA%CD59%A2780%補體
shRNA%CD59%A2780%보체
目的:构建针对人CD59基因的siRNA表达载体并筛选稳定细胞系,观察CD59基因改变后对补体溶破的抵抗作用的变化,探讨CD59在肿瘤细胞免疫逃逸及相关信号转导通路中的作用.方法:应用siRNA表达载体介导的RNAi技术,构建含特异性CD59基因的重组载体,脂质体法转染A2780细胞,G418筛选建立稳定抑制的细胞克隆,RT-PCR和Western blot检测转染细胞中CD59基因的表达抑制效果,染料释放试验判断CD59基因抑制后对补体溶破的抵抗作用的影响.结果:重组载体经PCR及限制性内切酶酶切鉴定初步成功后送测序,结果表明序列正确;重组载体转染A2780细胞,可表达绿色荧光蛋白,经G418筛选,得到抗性细胞克隆,RT-PCR和Western blot表明,稳定转染后CD59基因的mRNA和蛋白水平降低,染料释放试验表明CD59基因受抑制后对补体溶破的抵抗作用降低.结论:特异性沉默CD59基因的siRNA表达载体以及稳定抑制的细胞系构建和筛选成功,CD59基因抑制后对补体溶破的抵抗作用降低,为后续进行肿瘤细胞的研究奠定了基础.
目的:構建針對人CD59基因的siRNA錶達載體併篩選穩定細胞繫,觀察CD59基因改變後對補體溶破的牴抗作用的變化,探討CD59在腫瘤細胞免疫逃逸及相關信號轉導通路中的作用.方法:應用siRNA錶達載體介導的RNAi技術,構建含特異性CD59基因的重組載體,脂質體法轉染A2780細胞,G418篩選建立穩定抑製的細胞剋隆,RT-PCR和Western blot檢測轉染細胞中CD59基因的錶達抑製效果,染料釋放試驗判斷CD59基因抑製後對補體溶破的牴抗作用的影響.結果:重組載體經PCR及限製性內切酶酶切鑒定初步成功後送測序,結果錶明序列正確;重組載體轉染A2780細胞,可錶達綠色熒光蛋白,經G418篩選,得到抗性細胞剋隆,RT-PCR和Western blot錶明,穩定轉染後CD59基因的mRNA和蛋白水平降低,染料釋放試驗錶明CD59基因受抑製後對補體溶破的牴抗作用降低.結論:特異性沉默CD59基因的siRNA錶達載體以及穩定抑製的細胞繫構建和篩選成功,CD59基因抑製後對補體溶破的牴抗作用降低,為後續進行腫瘤細胞的研究奠定瞭基礎.
목적:구건침대인CD59기인적siRNA표체재체병사선은정세포계,관찰CD59기인개변후대보체용파적저항작용적변화,탐토CD59재종류세포면역도일급상관신호전도통로중적작용.방법:응용siRNA표체재체개도적RNAi기술,구건함특이성CD59기인적중조재체,지질체법전염A2780세포,G418사선건립은정억제적세포극륭,RT-PCR화Western blot검측전염세포중CD59기인적표체억제효과,염료석방시험판단CD59기인억제후대보체용파적저항작용적영향.결과:중조재체경PCR급한제성내절매매절감정초보성공후송측서,결과표명서렬정학;중조재체전염A2780세포,가표체록색형광단백,경G418사선,득도항성세포극륭,RT-PCR화Western blot표명,은정전염후CD59기인적mRNA화단백수평강저,염료석방시험표명CD59기인수억제후대보체용파적저항작용강저.결론:특이성침묵CD59기인적siRNA표체재체이급은정억제적세포계구건화사선성공,CD59기인억제후대보체용파적저항작용강저,위후속진행종류세포적연구전정료기출.
