辽宁大学学报（自然科学版）
遼寧大學學報（自然科學版）
료녕대학학보（자연과학판）
JOURNAL OF LIAONING UNIVERSITY(NATURAL SCIENCE EDITION)
2011年
2期
143-148
,共6页
朱春玉%孙婷婷%郑方亮%艾海新%朱俊峰%王宁%商玲玲%刘宏生
硃春玉%孫婷婷%鄭方亮%艾海新%硃俊峰%王寧%商玲玲%劉宏生
주춘옥%손정정%정방량%애해신%주준봉%왕저%상령령%류굉생
禽流感病毒H5N1%NS1蛋白%克隆%原核表达%纯化
禽流感病毒H5N1%NS1蛋白%剋隆%原覈錶達%純化
금류감병독H5N1%NS1단백%극륭%원핵표체%순화
克隆、表达和纯化禽流感病毒H5N1 NS1基因序列,为筛选与NS1相互作用的宿主蛋白以及深入研究NS1蛋白的功能打下基础.根据GenBank中收录的H5N1亚型禽流感病毒NS1基因序列,设计并合成一对特异性引物,利用RT-PCR方法扩增AIV NS1基因,将酶切处理后的基因片段定向克隆到原核表达载体pET-28a载体上,经酶切分析及序列测定正确后,鉴定出NS1基因的阳性重组子.阳性质粒转化大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞,用1 mmol/LIPTG诱导表达,表达产物进行SDS-PAGE检测,获得预期蛋白的表达,通过Ni-NTA树脂蛋白纯化系统对NS1蛋白进行纯化.结果成功克隆H5N1亚型AIV的NS1基因,其核苷酸序列长度为678 bp,重组蛋白在大肠杆菌中可以高效表达,SDS-PAGE显示其相对分子质量与预计大小一致,表达产物在上清及包涵体中均有表达.经纯化,目的蛋白纯度高达90%,成功表达纯化出28KD的NS1融合蛋白并鉴定其免疫学活性.成功克隆和表达了禽流感病毒H5N1 NS1基因序列,为进一步研究NS1蛋白的生物学功能奠定了坚实基础.
剋隆、錶達和純化禽流感病毒H5N1 NS1基因序列,為篩選與NS1相互作用的宿主蛋白以及深入研究NS1蛋白的功能打下基礎.根據GenBank中收錄的H5N1亞型禽流感病毒NS1基因序列,設計併閤成一對特異性引物,利用RT-PCR方法擴增AIV NS1基因,將酶切處理後的基因片段定嚮剋隆到原覈錶達載體pET-28a載體上,經酶切分析及序列測定正確後,鑒定齣NS1基因的暘性重組子.暘性質粒轉化大腸桿菌BL21(DE3)感受態細胞,用1 mmol/LIPTG誘導錶達,錶達產物進行SDS-PAGE檢測,穫得預期蛋白的錶達,通過Ni-NTA樹脂蛋白純化繫統對NS1蛋白進行純化.結果成功剋隆H5N1亞型AIV的NS1基因,其覈苷痠序列長度為678 bp,重組蛋白在大腸桿菌中可以高效錶達,SDS-PAGE顯示其相對分子質量與預計大小一緻,錶達產物在上清及包涵體中均有錶達.經純化,目的蛋白純度高達90%,成功錶達純化齣28KD的NS1融閤蛋白併鑒定其免疫學活性.成功剋隆和錶達瞭禽流感病毒H5N1 NS1基因序列,為進一步研究NS1蛋白的生物學功能奠定瞭堅實基礎.
극륭、표체화순화금류감병독H5N1 NS1기인서렬,위사선여NS1상호작용적숙주단백이급심입연구NS1단백적공능타하기출.근거GenBank중수록적H5N1아형금류감병독NS1기인서렬,설계병합성일대특이성인물,이용RT-PCR방법확증AIV NS1기인,장매절처리후적기인편단정향극륭도원핵표체재체pET-28a재체상,경매절분석급서렬측정정학후,감정출NS1기인적양성중조자.양성질립전화대장간균BL21(DE3)감수태세포,용1 mmol/LIPTG유도표체,표체산물진행SDS-PAGE검측,획득예기단백적표체,통과Ni-NTA수지단백순화계통대NS1단백진행순화.결과성공극륭H5N1아형AIV적NS1기인,기핵감산서렬장도위678 bp,중조단백재대장간균중가이고효표체,SDS-PAGE현시기상대분자질량여예계대소일치,표체산물재상청급포함체중균유표체.경순화,목적단백순도고체90%,성공표체순화출28KD적NS1융합단백병감정기면역학활성.성공극륭화표체료금류감병독H5N1 NS1기인서렬,위진일보연구NS1단백적생물학공능전정료견실기출.
