福建农业学报
福建農業學報
복건농업학보
FUJIAN JOURNAL OF AGRICULTURAL SCIENCES
2011年
2期
166-169
,共4页
车勇良%石运通%庄向生%陈少莺%王隆柏%魏宏%陈如敬%吴学敏%周伦江
車勇良%石運通%莊嚮生%陳少鶯%王隆柏%魏宏%陳如敬%吳學敏%週倫江
차용량%석운통%장향생%진소앵%왕륭백%위굉%진여경%오학민%주륜강
猪圆环病毒2型%ORF2%DNA疫苗%PcDNA3.1
豬圓環病毒2型%ORF2%DNA疫苗%PcDNA3.1
저원배병독2형%ORF2%DNA역묘%PcDNA3.1
[目的]构建猪圆环病毒2型(Porcine circovirus 2,PCV2)ORF2 DNA核酸疫苗,并评价其免疫效果和安全性.[方法]设计一对特异性引物,扩增PCV2-ORF2,利用T载体对其进行克隆,与真核表达载体PcDNA3.1在同等条件下进行双酶切,并进行连接,转化感受态细菌DH5a并克隆,经双酶切鉴定筛选阳性重组质粒,即DNA核酸疫苗,命名为PcDNA3.1-ORF2.将该核酸疫苗瞬时转染Vero细胞,通过RT-PCR鉴定其在细胞内的表达情况;并且将该核酸疫苗按100μg·只-1腿部肌肉注射免疫Balb/c小鼠,同时设PBS和PcDNA3.1空载体为对照,免疫2次,间隔2周-1分别于首免后第14 d和第28 d采血,用ELISA方法检测其血清抗体.取首免后56 d小鼠的心、肝、脾、肺、肾和脑等实质器官,采用PCR方法检测该核酸疫苗的安全性.[结果]成功地构建了PcDNA3.1-ORF2核酸疫苗,在体外Vero细胞中得到了瞬时表达,并且能诱导小鼠产生较强的免疫应答.安全性试验表明该核酸疫苗未整合到小鼠染色体上.[结论]PcDNA3.1-ORF2核酸疫苗可以诱导小鼠产生较强的免疫应答,并且是安全的.
[目的]構建豬圓環病毒2型(Porcine circovirus 2,PCV2)ORF2 DNA覈痠疫苗,併評價其免疫效果和安全性.[方法]設計一對特異性引物,擴增PCV2-ORF2,利用T載體對其進行剋隆,與真覈錶達載體PcDNA3.1在同等條件下進行雙酶切,併進行連接,轉化感受態細菌DH5a併剋隆,經雙酶切鑒定篩選暘性重組質粒,即DNA覈痠疫苗,命名為PcDNA3.1-ORF2.將該覈痠疫苗瞬時轉染Vero細胞,通過RT-PCR鑒定其在細胞內的錶達情況;併且將該覈痠疫苗按100μg·隻-1腿部肌肉註射免疫Balb/c小鼠,同時設PBS和PcDNA3.1空載體為對照,免疫2次,間隔2週-1分彆于首免後第14 d和第28 d採血,用ELISA方法檢測其血清抗體.取首免後56 d小鼠的心、肝、脾、肺、腎和腦等實質器官,採用PCR方法檢測該覈痠疫苗的安全性.[結果]成功地構建瞭PcDNA3.1-ORF2覈痠疫苗,在體外Vero細胞中得到瞭瞬時錶達,併且能誘導小鼠產生較彊的免疫應答.安全性試驗錶明該覈痠疫苗未整閤到小鼠染色體上.[結論]PcDNA3.1-ORF2覈痠疫苗可以誘導小鼠產生較彊的免疫應答,併且是安全的.
[목적]구건저원배병독2형(Porcine circovirus 2,PCV2)ORF2 DNA핵산역묘,병평개기면역효과화안전성.[방법]설계일대특이성인물,확증PCV2-ORF2,이용T재체대기진행극륭,여진핵표체재체PcDNA3.1재동등조건하진행쌍매절,병진행련접,전화감수태세균DH5a병극륭,경쌍매절감정사선양성중조질립,즉DNA핵산역묘,명명위PcDNA3.1-ORF2.장해핵산역묘순시전염Vero세포,통과RT-PCR감정기재세포내적표체정황;병차장해핵산역묘안100μg·지-1퇴부기육주사면역Balb/c소서,동시설PBS화PcDNA3.1공재체위대조,면역2차,간격2주-1분별우수면후제14 d화제28 d채혈,용ELISA방법검측기혈청항체.취수면후56 d소서적심、간、비、폐、신화뇌등실질기관,채용PCR방법검측해핵산역묘적안전성.[결과]성공지구건료PcDNA3.1-ORF2핵산역묘,재체외Vero세포중득도료순시표체,병차능유도소서산생교강적면역응답.안전성시험표명해핵산역묘미정합도소서염색체상.[결론]PcDNA3.1-ORF2핵산역묘가이유도소서산생교강적면역응답,병차시안전적.
