上海交通大学学报（医学版）
上海交通大學學報（醫學版）
상해교통대학학보（의학판）
JOURNAL OF SHANGHAI JIAOTONG UNIVERSITY(MEDICAL SCIENCE)
2011年
10期
1388-1392
,共5页
姜兆磊%朱家全%鲍春荣%丁芳宝%汤敏%梅举
薑兆磊%硃傢全%鮑春榮%丁芳寶%湯敏%梅舉
강조뢰%주가전%포춘영%정방보%탕민%매거
慢病毒载体%RNA干扰%器官移植%趋化因子受体5
慢病毒載體%RNA榦擾%器官移植%趨化因子受體5
만병독재체%RNA간우%기관이식%추화인자수체5
目的 构建含趋化因子受体5(CCR5) -短发夹状RNA(shRNA)的重组慢病毒,观察其对小鼠外周血CD34+造血干细胞(CD34+细胞)CCR5mRNA表达的影响.方法 使用Ambion RNAi靶序列及参考相关文献设计并确定RNA干扰(RNAi)靶序列.将靶序列转入克隆载体pBShH1扩增,再转入含增强型绿色荧光蛋白(EGFP)的FG12慢病毒载体,酶切、测序鉴定.包装CCR5-shRNA慢病毒并测定滴度,转染小鼠外周血CD34+细胞,检测转染效率.将CCR5-shRNA慢病毒转染的CD34+细胞回输小鼠体内,1周后采用Real-Time PCR检测细胞CCR5 mRNA的表达.结果 相关鉴定结果显示:目的片段插入了FG12载体,并带入pBSHH1上的H1 RNA polymeraseⅢ启动子,CCR5-shRNA慢病毒载体构建完成；病毒感染滴度为5×107 TU/mL;CCR5-shRNA慢病毒对小鼠外周血CD34+细胞的转染效率为97.9％；Real-Time PCR检测结果显示:转染CCR5-shRNA慢病毒的CD34+细胞回输后,小鼠外周血CD34+细胞CCR5 mRNA表达显著下降.结论 成功制备高滴度的CCR5-shRNA重组慢病毒,该病毒在体内能有效下调小鼠外周血CD34+细胞CCR5 mRNA的表达,为治疗器官移植后排斥反应的研究奠定了基础.
目的 構建含趨化因子受體5(CCR5) -短髮夾狀RNA(shRNA)的重組慢病毒,觀察其對小鼠外週血CD34+造血榦細胞(CD34+細胞)CCR5mRNA錶達的影響.方法 使用Ambion RNAi靶序列及參攷相關文獻設計併確定RNA榦擾(RNAi)靶序列.將靶序列轉入剋隆載體pBShH1擴增,再轉入含增彊型綠色熒光蛋白(EGFP)的FG12慢病毒載體,酶切、測序鑒定.包裝CCR5-shRNA慢病毒併測定滴度,轉染小鼠外週血CD34+細胞,檢測轉染效率.將CCR5-shRNA慢病毒轉染的CD34+細胞迴輸小鼠體內,1週後採用Real-Time PCR檢測細胞CCR5 mRNA的錶達.結果 相關鑒定結果顯示:目的片段插入瞭FG12載體,併帶入pBSHH1上的H1 RNA polymeraseⅢ啟動子,CCR5-shRNA慢病毒載體構建完成；病毒感染滴度為5×107 TU/mL;CCR5-shRNA慢病毒對小鼠外週血CD34+細胞的轉染效率為97.9％；Real-Time PCR檢測結果顯示:轉染CCR5-shRNA慢病毒的CD34+細胞迴輸後,小鼠外週血CD34+細胞CCR5 mRNA錶達顯著下降.結論 成功製備高滴度的CCR5-shRNA重組慢病毒,該病毒在體內能有效下調小鼠外週血CD34+細胞CCR5 mRNA的錶達,為治療器官移植後排斥反應的研究奠定瞭基礎.
목적 구건함추화인자수체5(CCR5) -단발협상RNA(shRNA)적중조만병독,관찰기대소서외주혈CD34+조혈간세포(CD34+세포)CCR5mRNA표체적영향.방법 사용Ambion RNAi파서렬급삼고상관문헌설계병학정RNA간우(RNAi)파서렬.장파서렬전입극륭재체pBShH1확증,재전입함증강형록색형광단백(EGFP)적FG12만병독재체,매절、측서감정.포장CCR5-shRNA만병독병측정적도,전염소서외주혈CD34+세포,검측전염효솔.장CCR5-shRNA만병독전염적CD34+세포회수소서체내,1주후채용Real-Time PCR검측세포CCR5 mRNA적표체.결과 상관감정결과현시:목적편단삽입료FG12재체,병대입pBSHH1상적H1 RNA polymeraseⅢ계동자,CCR5-shRNA만병독재체구건완성；병독감염적도위5×107 TU/mL;CCR5-shRNA만병독대소서외주혈CD34+세포적전염효솔위97.9％；Real-Time PCR검측결과현시:전염CCR5-shRNA만병독적CD34+세포회수후,소서외주혈CD34+세포CCR5 mRNA표체현저하강.결론 성공제비고적도적CCR5-shRNA중조만병독,해병독재체내능유효하조소서외주혈CD34+세포CCR5 mRNA적표체,위치료기관이식후배척반응적연구전정료기출.
