猴B病毒gB基因在昆虫细胞中的表达
후B병독gB기인재곤충세포중적표체
Expression on gB gene of simian B virus in insect cells
  • 万方数据
    中国人兽共患病学报 중국인수공환병학보
    CHINESE JOURNAL OF ZOONOSES
    2012年 7期 674-678 ,共5页

    段博芳%王琼%段纲%毛永杨%叶玲玲%杨建明%徐维加%董俊%周晓黎%艾军

    단박방%왕경%단강%모영양%협령령%양건명%서유가%동준%주효려%애군

    猴B病毒%gB基因%杆状病毒表达载体%昆虫细胞 猴B病毒%gB基因%桿狀病毒錶達載體%昆蟲細胞
    후B병독%gB기인%간상병독표체재체%곤충세포
    目的 研发猴B病毒ELlSA检测试剂盒中替代全病毒的抗原.方法 根据已报道的猴B病毒E2490株gB蛋白基因序列(GenBank登录号:AF533768)人工合成gB基因,通过XbaⅠ和EcoR I特异性酶切,将gB基因克隆于昆虫杆状病毒表达载体pFastBacHTA,经PCR、酶切、测序鉴定后,成功构建了携带gB基因的重组质粒pFastBac-HTa-gB.结果 该重组质粒转化含有杆状病毒穿梭载体的DH10BAC感受态细胞,经抗生素、PCR筛选,获得转座的杆粒bacmid-gB.在脂质体介导下转染sf9昆虫细胞,细胞变大变圊细胞核扩大,收获重组杆状病毒,再感染细胞,收获目的蛋白.通过SDS-PAGE和Western blot分析及间接免疫荧光检测,结果表明该蛋白得到表达,且具有良好的生物活性,大小约为98 kDa.实验结果表明已成功构建了携带目的基因的重组质粒pFastBac- HTa-gB和转座的杆粒bacmid-gB,转染后在sf9昆虫细胞上得到表达.结论 研究结果为下一步以表达的gB蛋白为诊断抗原,替代现阶段以病毒作为抗原的猴B病毒ELISA检测试剂盒的研制奠定了基础.
    목적 연발후B병독ELlSA검측시제합중체대전병독적항원.방법 근거이보도적후B병독E2490주gB단백기인서렬(GenBank등록호:AF533768)인공합성gB기인,통과XbaⅠ화EcoR I특이성매절,장gB기인극륭우곤충간상병독표체재체pFastBacHTA,경PCR、매절、측서감정후,성공구건료휴대gB기인적중조질립pFastBac-HTa-gB.결과 해중조질립전화함유간상병독천사재체적DH10BAC감수태세포,경항생소、PCR사선,획득전좌적간립bacmid-gB.재지질체개도하전염sf9곤충세포,세포변대변청세포핵확대,수획중조간상병독,재감염세포,수획목적단백.통과SDS-PAGE화Western blot분석급간접면역형광검측,결과표명해단백득도표체,차구유량호적생물활성,대소약위98 kDa.실험결과표명이성공구건료휴대목적기인적중조질립pFastBac- HTa-gB화전좌적간립bacmid-gB,전염후재sf9곤충세포상득도표체.결론 연구결과위하일보이표체적gB단백위진단항원,체대현계단이병독작위항원적후B병독ELISA검측시제합적연제전정료기출.
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