CAJ | 학술논문

目的建立一种同时定量检测多种白血病染色体易位形成的融合基因的荧光实时定量聚合酶链反应(real-time PCR)方法,了解阵列式PCR的应用可行性.方法组合使用82条引物,设立66个PCR平行管,同时定量检测37种白血病常见融合基因形成的125种剪切体和4种白血病常见的原癌基因活化.实时定量PCR采用Eva Green荧光染料法,用ABL基因做内参,用比较Ct法进行相对定量.用此方案对31例白血病患者标本进行检测,其中6例慢性粒细胞白血病(CML)患者做治疗前后或治疗过程中不同时间的对比检测,28人次与多重巢式PCR方案的检测结果进行对照.结果我们建立的PCR阵列方案有较大的线性检测范围(102～108拷贝/μl),有较高的检测灵敏度(232拷贝/μl)和精确性;在31例患者标本的检测中,共检测到14种融合基因类型和所有4种原癌基因活化;检测到一例同时有5种融合基因阳性和两种原癌基因活化的患者;和多重巢式PCR检测结果的对比显示本方案灵敏度略低于巢式PCR,但差异没有统计学意义(P=0.009);6例CML患者标本的检测显示治疗后患者标本中BCR/ABL融合基因及WTl和EVIl原癌基因表达量均呈现不同程度的降低,与临床治疗情况符合;基因定量分析的结果表明本方案能够对常见白血病融合基因和癌基因活化情况进行定量分析,在白血病的诊断及疗效监测中有应用价值.结论 PCR阵列法同时定量检测多种白血病融合基因适于白血病初诊患者融合基因的筛查及微小残留病(MRD)的检测,对于检测同时有多种融合基因存在的病例及治疗过程中融合基因的变异情况更为有用.
목적 건립일충동시정량검측다충백혈병염색체역위형성적융합기인적형광실시정량취합매련반응(real-time PCR)방법,료해진렬식PCR적응용가행성.방법 조합사용82조인물,설립66개PCR평행관,동시정량검측37충백혈병상견융합기인형성적125충전절체화4충백혈병상견적원암기인활화.실시정량PCR채용Eva Green형광염료법,용ABL기인주내삼,용비교Ct법진행상대정량.용차방안대31례백혈병환자표본진행검측,기중6례만성립세포백혈병(CML)환자주치료전후혹치료과정중불동시간적대비검측,28인차여다중소식PCR방안적검측결과진행대조.결과 아문건립적PCR진렬방안유교대적선성검측범위(102～108고패/μl),유교고적검측령민도(232고패/μl)화정학성;재31례환자표본적검측중,공검측도14충융합기인류형화소유4충원암기인활화;검측도일례동시유5충융합기인양성화량충원암기인활화적환자;화다중소식PCR검측결과적대비현시본방안령민도략저우소식PCR,단차이몰유통계학의의(P=0.009);6례CML환자표본적검측현시치료후환자표본중BCR/ABL융합기인급WTl화EVIl원암기인표체량균정현불동정도적강저,여림상치료정황부합;기인정량분석적결과표명본방안능구대상견백혈병융합기인화암기인활화정황진행정량분석,재백혈병적진단급료효감측중유응용개치.결론 PCR진렬법동시정량검측다충백혈병융합기인괄우백혈병초진환자융합기인적사사급미소잔류병(MRD)적검측,대우검측동시유다충융합기인존재적병례급치료과정중융합기인적변이정황경위유용.