安徽医科大学学报
安徽醫科大學學報
안휘의과대학학보
ACTA UNIVERSITY MEDICINALIS ANHUI
2007年
3期
272-275
,共4页
虞结梅%杨兵%谢灿%陆燕燕%何金生
虞結梅%楊兵%謝燦%陸燕燕%何金生
우결매%양병%사찬%륙연연%하금생
细菌噬菌体T7/遗传学%转录,遗传
細菌噬菌體T7/遺傳學%轉錄,遺傳
세균서균체T7/유전학%전록,유전
目的 构建含T7 RNA聚合酶(T7 RNA Polymerase,T7 RNP)的真核表达载体,同时构建含T7启动子、增强型绿色荧光蛋白(Enhanced Green Fluorescent Protein, EGFP)和T7 RNP转录终止信号的载体,并通过观察EGFP的表达推测T7 RNP表达和T7表达系统介导基因转录的功能.方法 根据编码T7 RNP的基因序列,应用PCR技术从含有T7 RNP基因的E.coli BL21(DE3)基因组中扩增编码T7 RNP的基因片段,克隆至载体pcDNA 3.1(+).同时从px8δt载体和pGEM-T easy/EGFP上切下T7 RNP识别的终止信号(terminator,TER)和编码EGFP的基因,克隆至载体pcDNAII.将获得的两个重组质粒共转染BHK细胞.48 h后,通过观察EGFP基因在真核细胞内的表达情况,推测T7 RNP基因的表达及表达后识别T7启动子介导基因转录功能.结果 成功构建了含T7 RNP编码基因的真核表达载体pcDNA 3.1(+)/T7 RNP和原核表达载体pcDNAII/EGFP/TER,共转染BHK细胞后,可观察到EGFP表达的绿色荧光.结论 T7 RNP能顺利在真核细胞内表达,并通过与T7启动子和TER的相互作用,成功实现了EGFP基因的转录和表达.
目的 構建含T7 RNA聚閤酶(T7 RNA Polymerase,T7 RNP)的真覈錶達載體,同時構建含T7啟動子、增彊型綠色熒光蛋白(Enhanced Green Fluorescent Protein, EGFP)和T7 RNP轉錄終止信號的載體,併通過觀察EGFP的錶達推測T7 RNP錶達和T7錶達繫統介導基因轉錄的功能.方法 根據編碼T7 RNP的基因序列,應用PCR技術從含有T7 RNP基因的E.coli BL21(DE3)基因組中擴增編碼T7 RNP的基因片段,剋隆至載體pcDNA 3.1(+).同時從px8δt載體和pGEM-T easy/EGFP上切下T7 RNP識彆的終止信號(terminator,TER)和編碼EGFP的基因,剋隆至載體pcDNAII.將穫得的兩箇重組質粒共轉染BHK細胞.48 h後,通過觀察EGFP基因在真覈細胞內的錶達情況,推測T7 RNP基因的錶達及錶達後識彆T7啟動子介導基因轉錄功能.結果 成功構建瞭含T7 RNP編碼基因的真覈錶達載體pcDNA 3.1(+)/T7 RNP和原覈錶達載體pcDNAII/EGFP/TER,共轉染BHK細胞後,可觀察到EGFP錶達的綠色熒光.結論 T7 RNP能順利在真覈細胞內錶達,併通過與T7啟動子和TER的相互作用,成功實現瞭EGFP基因的轉錄和錶達.
목적 구건함T7 RNA취합매(T7 RNA Polymerase,T7 RNP)적진핵표체재체,동시구건함T7계동자、증강형록색형광단백(Enhanced Green Fluorescent Protein, EGFP)화T7 RNP전록종지신호적재체,병통과관찰EGFP적표체추측T7 RNP표체화T7표체계통개도기인전록적공능.방법 근거편마T7 RNP적기인서렬,응용PCR기술종함유T7 RNP기인적E.coli BL21(DE3)기인조중확증편마T7 RNP적기인편단,극륭지재체pcDNA 3.1(+).동시종px8δt재체화pGEM-T easy/EGFP상절하T7 RNP식별적종지신호(terminator,TER)화편마EGFP적기인,극륭지재체pcDNAII.장획득적량개중조질립공전염BHK세포.48 h후,통과관찰EGFP기인재진핵세포내적표체정황,추측T7 RNP기인적표체급표체후식별T7계동자개도기인전록공능.결과 성공구건료함T7 RNP편마기인적진핵표체재체pcDNA 3.1(+)/T7 RNP화원핵표체재체pcDNAII/EGFP/TER,공전염BHK세포후,가관찰도EGFP표체적록색형광.결론 T7 RNP능순리재진핵세포내표체,병통과여T7계동자화TER적상호작용,성공실현료EGFP기인적전록화표체.
