甘肃农业大学学报
甘肅農業大學學報
감숙농업대학학보
JOURNAL OF GANSU AGRICULTURAL UNIVERSITY
2008年
2期
8-12
,共5页
潘华奇%刘磊%曹瑞兵%魏凡华%袁立科%李娟%孙海亮%潘光炎
潘華奇%劉磊%曹瑞兵%魏凡華%袁立科%李娟%孫海亮%潘光炎
반화기%류뢰%조서병%위범화%원립과%리연%손해량%반광염
鸭瘟病毒%EGFP%Cre/LoxP%TK基因%转移载体
鴨瘟病毒%EGFP%Cre/LoxP%TK基因%轉移載體
압온병독%EGFP%Cre/LoxP%TK기인%전이재체
提取鸭瘟病毒(DPV)疫苗株基因组DNA为PCR扩增模板.并根据GenBank已发表的DPV UL区UL24、UL23、UL22基因序列.选择保守序列设计了两对引物.分别扩增出位于UL23(TK)两侧的可用于同源重组的左臂片段(L)和右臂片段(R).L包括部分UL24、部分TK,R包括部分TK及部分UL22,L和R的拼接片段中TK基因内部缺失468个核苷酸.将L片段和R片段克隆于pBluescript M13-载体上.获得了pSKLR;再将含2个LoxP位点的表达绿色荧光蛋白的基因表达盒插人pSKLR的L片段和R片段之间构成转移载体pSKLR-EGEP-LoxP.大量提取pSKLR-EGEP-LoxP质粒.用脂质体转染鸭胚成纤维细胞.24 h后蛋白被正确表达.表明含LoxP位点的表达EGFP的鸭瘟病毒TK基因缺失的重组转移载体被成功构建.
提取鴨瘟病毒(DPV)疫苗株基因組DNA為PCR擴增模闆.併根據GenBank已髮錶的DPV UL區UL24、UL23、UL22基因序列.選擇保守序列設計瞭兩對引物.分彆擴增齣位于UL23(TK)兩側的可用于同源重組的左臂片段(L)和右臂片段(R).L包括部分UL24、部分TK,R包括部分TK及部分UL22,L和R的拼接片段中TK基因內部缺失468箇覈苷痠.將L片段和R片段剋隆于pBluescript M13-載體上.穫得瞭pSKLR;再將含2箇LoxP位點的錶達綠色熒光蛋白的基因錶達盒插人pSKLR的L片段和R片段之間構成轉移載體pSKLR-EGEP-LoxP.大量提取pSKLR-EGEP-LoxP質粒.用脂質體轉染鴨胚成纖維細胞.24 h後蛋白被正確錶達.錶明含LoxP位點的錶達EGFP的鴨瘟病毒TK基因缺失的重組轉移載體被成功構建.
제취압온병독(DPV)역묘주기인조DNA위PCR확증모판.병근거GenBank이발표적DPV UL구UL24、UL23、UL22기인서렬.선택보수서렬설계료량대인물.분별확증출위우UL23(TK)량측적가용우동원중조적좌비편단(L)화우비편단(R).L포괄부분UL24、부분TK,R포괄부분TK급부분UL22,L화R적병접편단중TK기인내부결실468개핵감산.장L편단화R편단극륭우pBluescript M13-재체상.획득료pSKLR;재장함2개LoxP위점적표체록색형광단백적기인표체합삽인pSKLR적L편단화R편단지간구성전이재체pSKLR-EGEP-LoxP.대량제취pSKLR-EGEP-LoxP질립.용지질체전염압배성섬유세포.24 h후단백피정학표체.표명함LoxP위점적표체EGFP적압온병독TK기인결실적중조전이재체피성공구건.
