CAJ | 학술논문

背景:过氧化物酶体增殖物激活受体γ是细胞分化重要的调控因子,通过调节其他转录因子的表达,参与调节骨髓间充质干细胞的分化.目的:构建pEGFP-N1-过氧化物酶体增殖物激活受体γ真核表达载体,体外转染兔骨髓间充质干细胞,为过氧化物酶体增殖物激活受体γ受体功能和基于过氧化物酶体增殖物激活受体γ受体靶点的药物筛选提供分子研究平台.设计、时间及地点:单一样本观察,于2007-09/2008-07在南华大学附属一医院临床研究所完成.材料:选择雄性2-5月龄新两兰大白兔,用丁分离培养骨髓间充质干细胞.方法:应用密度梯度离心法分离骨髓间充质干细胞,贴壁法不断纯化.从正常小鼠的肝组织中提取总RNA,反转录-聚合酶链反应法获得过氧化物酶体增殖物激活受体γcDNA.经Xho Ⅰ,Apa Ⅰ双酶切,定向克隆到真核表达载体pEGFP-N1,构建重组质粒pEGFP-N1-过氧化物酶体增殖物激活受体γ.主要观察指标:经酶切分析和测序鉴定重组质粒中过氧化物酶体增殖物激活受体γ基因的完整性和真实性,脂质体介导下体外转染骨髓间充质干细胞,荧光倒置显微镜下观察瞬时表达及转染效率,提取总RNA和总蛋白,进行反转录-聚合酶链反应和Western blot检测.结果:获得的过氧化物酶体增殖物激活受体γ基因片段经酶切和测序鉴定正确,重组质粒经酶切和测序鉴定证实构建正确,成功转染骨髓间充质干细胞,在其中检测到目的基因及蛋白表达.结论:实验成功构建了pEGFP-N1-过氧化物酶体增殖物激活受体γ重组质粒,同时在转染的骨髓间充质干细胞中获得了过氧化物酶体增殖物激活受体γ的高效表达.
배경:과양화물매체증식물격활수체γ시세포분화중요적조공인자,통과조절기타전록인자적표체,삼여조절골수간충질간세포적분화.목적:구건pEGFP-N1-과양화물매체증식물격활수체γ진핵표체재체,체외전염토골수간충질간세포,위과양화물매체증식물격활수체γ수체공능화기우과양화물매체증식물격활수체γ수체파점적약물사선제공분자연구평태.설계、시간급지점:단일양본관찰,우2007-09/2008-07재남화대학부속일의원림상연구소완성.재료:선택웅성2-5월령신량란대백토,용정분리배양골수간충질간세포.방법:응용밀도제도리심법분리골수간충질간세포,첩벽법불단순화.종정상소서적간조직중제취총RNA,반전록-취합매련반응법획득과양화물매체증식물격활수체γcDNA.경Xho Ⅰ,Apa Ⅰ쌍매절,정향극륭도진핵표체재체pEGFP-N1,구건중조질립pEGFP-N1-과양화물매체증식물격활수체γ.주요관찰지표:경매절분석화측서감정중조질립중과양화물매체증식물격활수체γ기인적완정성화진실성,지질체개도하체외전염골수간충질간세포,형광도치현미경하관찰순시표체급전염효솔,제취총RNA화총단백,진행반전록-취합매련반응화Western blot검측.결과:획득적과양화물매체증식물격활수체γ기인편단경매절화측서감정정학,중조질립경매절화측서감정증실구건정학,성공전염골수간충질간세포,재기중검측도목적기인급단백표체.결론:실험성공구건료pEGFP-N1-과양화물매체증식물격활수체γ중조질립,동시재전염적골수간충질간세포중획득료과양화물매체증식물격활수체γ적고효표체.