四川大学学报（医学版）
四川大學學報（醫學版）
사천대학학보（의학판）
JOURNAL OF SICHUAN UNIVERSITY(MEDICAL SCIENCE EDITION)
2009年
4期
579-583
,共5页
罗晓蕾%任潇潇%黄浓郁%邱吉%李倩%周西坤%李炯
囉曉蕾%任瀟瀟%黃濃鬱%邱吉%李倩%週西坤%李炯
라효뢰%임소소%황농욱%구길%리천%주서곤%리형
重组小鼠白细胞介素-4%蛋白纯化%生物学活性
重組小鼠白細胞介素-4%蛋白純化%生物學活性
중조소서백세포개소-4%단백순화%생물학활성
目的 构建重组小鼠白细胞介素-4(rmIL-4)原核表达载体,在大肠杆菌BL21(DE3)中诱导表达,纯化目的蛋白并鉴定.方法 将优化后的小鼠IL-4 cDNA片段克隆到原核表达载体pET-32a (+)上,获得重组质粒pET32/rmIL-4,转入BL21(DE3)中经IPTG诱导表达得到包涵体.经复性处理后,依次用阴离子交换柱和分子筛纯化蛋白.对纯化得到的蛋白用Western blot检验免疫学特异性,用mIL-4生长依赖性细胞株CTLL-2增殖实验和动物实验测定其生物学活性.结果 经酶切和测序证实重组质粒pET32/rmIL-4构建成功.诱导得到的包涵体用3 mol/L盐酸胍溶液洗涤后溶于加有β-巯基乙醇的7 mol/L盐酸胍溶液中变性,在pH9.5的条件下梯度透析复性.纯化出的蛋白经Western blot鉴定,能与抗小鼠IL-4抗体特异性结合;经细胞和动物实验鉴定,rmIL-4蛋白具有生物学活性,能刺激mIL-4生长依赖性细胞株CTLL-2增殖,使小鼠体内细胞因子发生从TH1到TH2的漂移.结论 成功制备了高纯度、具有生物学活性的小鼠IL-4,为进一步研究其生物学功能提供了条件.
目的 構建重組小鼠白細胞介素-4(rmIL-4)原覈錶達載體,在大腸桿菌BL21(DE3)中誘導錶達,純化目的蛋白併鑒定.方法 將優化後的小鼠IL-4 cDNA片段剋隆到原覈錶達載體pET-32a (+)上,穫得重組質粒pET32/rmIL-4,轉入BL21(DE3)中經IPTG誘導錶達得到包涵體.經複性處理後,依次用陰離子交換柱和分子篩純化蛋白.對純化得到的蛋白用Western blot檢驗免疫學特異性,用mIL-4生長依賴性細胞株CTLL-2增殖實驗和動物實驗測定其生物學活性.結果 經酶切和測序證實重組質粒pET32/rmIL-4構建成功.誘導得到的包涵體用3 mol/L鹽痠胍溶液洗滌後溶于加有β-巰基乙醇的7 mol/L鹽痠胍溶液中變性,在pH9.5的條件下梯度透析複性.純化齣的蛋白經Western blot鑒定,能與抗小鼠IL-4抗體特異性結閤;經細胞和動物實驗鑒定,rmIL-4蛋白具有生物學活性,能刺激mIL-4生長依賴性細胞株CTLL-2增殖,使小鼠體內細胞因子髮生從TH1到TH2的漂移.結論 成功製備瞭高純度、具有生物學活性的小鼠IL-4,為進一步研究其生物學功能提供瞭條件.
목적 구건중조소서백세포개소-4(rmIL-4)원핵표체재체,재대장간균BL21(DE3)중유도표체,순화목적단백병감정.방법 장우화후적소서IL-4 cDNA편단극륭도원핵표체재체pET-32a (+)상,획득중조질립pET32/rmIL-4,전입BL21(DE3)중경IPTG유도표체득도포함체.경복성처리후,의차용음리자교환주화분자사순화단백.대순화득도적단백용Western blot검험면역학특이성,용mIL-4생장의뢰성세포주CTLL-2증식실험화동물실험측정기생물학활성.결과 경매절화측서증실중조질립pET32/rmIL-4구건성공.유도득도적포함체용3 mol/L염산고용액세조후용우가유β-구기을순적7 mol/L염산고용액중변성,재pH9.5적조건하제도투석복성.순화출적단백경Western blot감정,능여항소서IL-4항체특이성결합;경세포화동물실험감정,rmIL-4단백구유생물학활성,능자격mIL-4생장의뢰성세포주CTLL-2증식,사소서체내세포인자발생종TH1도TH2적표이.결론 성공제비료고순도、구유생물학활성적소서IL-4,위진일보연구기생물학공능제공료조건.
