CAJ | 학술논문

目的:以不同浓度以及序列的小干扰RNA(SiRNA)转染,培养大鼠的背根神经节(DRG),观察对神经元形态、活性变化以及瞬时感受器电位离子4(TRPV4)通道功能的影响,筛选转染这种神经元的SiRNA.方法:取新生大鼠腰背段全部DRG,将处理好的DRG神经元进行培养,将神经元随机分为正常对照组、SiRNA不同浓度组、错配组,进行SiRNA转染,然后培养相应时间后观察各组神经元在荧光显微镜的形态学特点,并用四甲基偶氮唑兰比色法(MTT)分析各组神经元细胞生长活性的改变.另外利用Fluo3荧光探针,观察SiRNA作用下细胞内游离钙对低渗溶液的反应,采用酶联免疫法方法观察KCI刺激下各组细胞释放P物质的改变.结果:荧光显微镜下观察适宜浓度组SiRNA转染DRG神经元形态较正常组无明显差异.MTT法比较10-40nM各组神经元活性的差异无显著性意义.而SiRNA作用下细胞内游离钙对低渗溶液的反应以及细胞释放P物质的改变有显著差异.结论:40-80nMSiRNA可以有效转染DRG细胞,未对DRG神经元活性产生显著影响,这为研究TRPV4通道功能提供了一个有效的方法.
목적:이불동농도이급서렬적소간우RNA(SiRNA)전염,배양대서적배근신경절(DRG),관찰대신경원형태、활성변화이급순시감수기전위리자4(TRPV4)통도공능적영향,사선전염저충신경원적SiRNA.방법:취신생대서요배단전부DRG,장처리호적DRG신경원진행배양,장신경원수궤분위정상대조조、SiRNA불동농도조、착배조,진행SiRNA전염,연후배양상응시간후관찰각조신경원재형광현미경적형태학특점,병용사갑기우담서란비색법(MTT)분석각조신경원세포생장활성적개변.령외이용Fluo3형광탐침,관찰SiRNA작용하세포내유리개대저삼용액적반응,채용매련면역법방법관찰KCI자격하각조세포석방P물질적개변.결과:형광현미경하관찰괄의농도조SiRNA전염DRG신경원형태교정상조무명현차이.MTT법비교10-40nM각조신경원활성적차이무현저성의의.이SiRNA작용하세포내유리개대저삼용액적반응이급세포석방P물질적개변유현저차이.결론:40-80nMSiRNA가이유효전염DRG세포,미대DRG신경원활성산생현저영향,저위연구TRPV4통도공능제공료일개유효적방법.