人HMGN5基因shRNA慢病毒载体构建与RNAi效率的鉴定
인HMGN5기인shRNA만병독재체구건여RNAi효솔적감정
Construction of shRNA lentiviral vector targeting human HMGN5gene and identification of RNAi efficiency
  • 万方数据
    中国实验诊断学 중국실험진단학
    CHINESE JOURNAL OF LABORATORY DIAGNOSIS
    2011年 1期 7-10 ,共4页

    陈鹏%马忠森%王秀丽%李博%任锦%胡娱新%郏博%刘锋%石莹

    진붕%마충삼%왕수려%리박%임금%호오신%겹박%류봉%석형

    HMGN5%shRNA%慢病毒 HMGN5%shRNA%慢病毒
    HMGN5%shRNA%만병독
    目的 构建人HMGN5基因的shRNA慢病毒载体并鉴定在肺癌A549和H1299细胞上的沉默效率.方法 设计HMGN5基因特异性siRNA靶点,构建于慢病毒pLL-3.7载体,并筛选获得有效的shRNA慢病毒载体,在293T细胞包装成病毒颗粒,将其感染肺癌A549和H1299细胞,应用Real-time PCR方法从mRNA水平上检测HMGN5的沉默效率.结果构建的慢病毒载体shRNA的PCR鉴定和测序正确,包装病毒后滴度达到5×108 TU/ml.shRNA慢病毒颗粒感染A549和H1299细胞后HMGN5基因的mRNA表达量较阴性对照载体慢病毒感染组分别下降了71.7%和50.7%.结论 成功构建了HMGN5基因的shRNA慢病毒表达载体,在分子水平能够有效沉默靶基因,为探讨HMGN5在肿瘤基因治疗中的作用奠定了基础.
    목적 구건인HMGN5기인적shRNA만병독재체병감정재폐암A549화H1299세포상적침묵효솔.방법 설계HMGN5기인특이성siRNA파점,구건우만병독pLL-3.7재체,병사선획득유효적shRNA만병독재체,재293T세포포장성병독과립,장기감염폐암A549화H1299세포,응용Real-time PCR방법종mRNA수평상검측HMGN5적침묵효솔.결과구건적만병독재체shRNA적PCR감정화측서정학,포장병독후적도체도5×108 TU/ml.shRNA만병독과립감염A549화H1299세포후HMGN5기인적mRNA표체량교음성대조재체만병독감염조분별하강료71.7%화50.7%.결론 성공구건료HMGN5기인적shRNA만병독표체재체,재분자수평능구유효침묵파기인,위탐토HMGN5재종류기인치료중적작용전정료기출.
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