中国预防兽医学报
中國預防獸醫學報
중국예방수의학보
CHINESE JOURNAL OF PREVENTIVE VETERINARY MEDICINE
2011年
4期
323-326
,共4页
刘霄卉%罗军荣%斯日古楞%周建华%马学恩
劉霄卉%囉軍榮%斯日古楞%週建華%馬學恩
류소훼%라군영%사일고릉%주건화%마학은
绵羊肺腺瘤反转录病毒%跨膜蛋白%真核表达%HepG2细胞系
綿羊肺腺瘤反轉錄病毒%跨膜蛋白%真覈錶達%HepG2細胞繫
면양폐선류반전록병독%과막단백%진핵표체%HepG2세포계
为深入研究绵羊肺腺瘤病毒(JSRV)与绵羊肺腺瘤病(OPA)发病关系,本研究采用PCR方法从pGEX-4T-1-TM重组质粒中扩增编码JSRV跨膜蛋白(TM)的基因序列,并引入标签多肽HA序列和限制性内切酶位点,将其重组至真核表达载体pcDNA3.1(+)中,构建了重组质粒pcDNA-TM-HA.通过转染HepG2细胞并用G418筛选,对稳定表达TM的阳性细胞进行纯化,获得了稳定表达JSRV tm基因的HepG2细胞系.间接免疫荧光及western blot检测结果表明,重组蛋白TM-HA在HepG2细胞中得到正确表达.JSRV TM蛋白稳定表达细胞系的建立为进一步研究该蛋白与JSRV诱导OPA发病关系提供了重要的实验平台.
為深入研究綿羊肺腺瘤病毒(JSRV)與綿羊肺腺瘤病(OPA)髮病關繫,本研究採用PCR方法從pGEX-4T-1-TM重組質粒中擴增編碼JSRV跨膜蛋白(TM)的基因序列,併引入標籤多肽HA序列和限製性內切酶位點,將其重組至真覈錶達載體pcDNA3.1(+)中,構建瞭重組質粒pcDNA-TM-HA.通過轉染HepG2細胞併用G418篩選,對穩定錶達TM的暘性細胞進行純化,穫得瞭穩定錶達JSRV tm基因的HepG2細胞繫.間接免疫熒光及western blot檢測結果錶明,重組蛋白TM-HA在HepG2細胞中得到正確錶達.JSRV TM蛋白穩定錶達細胞繫的建立為進一步研究該蛋白與JSRV誘導OPA髮病關繫提供瞭重要的實驗平檯.
위심입연구면양폐선류병독(JSRV)여면양폐선류병(OPA)발병관계,본연구채용PCR방법종pGEX-4T-1-TM중조질립중확증편마JSRV과막단백(TM)적기인서렬,병인입표첨다태HA서렬화한제성내절매위점,장기중조지진핵표체재체pcDNA3.1(+)중,구건료중조질립pcDNA-TM-HA.통과전염HepG2세포병용G418사선,대은정표체TM적양성세포진행순화,획득료은정표체JSRV tm기인적HepG2세포계.간접면역형광급western blot검측결과표명,중조단백TM-HA재HepG2세포중득도정학표체.JSRV TM단백은정표체세포계적건립위진일보연구해단백여JSRV유도OPA발병관계제공료중요적실험평태.
