CAJ | 학술논문

[目的]通过表达和纯化捻转血矛线虫新功能基因He38最大开放阅读框ORF1,确定完整的Hc38蛋白天然表达形式、分子量大小和免疫学活性鉴定,为研究该基因功能和基因工程应用奠定基础.[方法]参照本实验室在GenBank上登录的捻转血矛线虫ZJ株的He38基因序列(AY594263)设计引物,PCR扩增目的基因并克隆到表达载体中,重组表达载体转化大肠杆菌后IPTG诱导表达,SDS-PAGE和薄层扫描检测分析表达产物,通过亲和层析柱对重组蛋白进行纯化,并用Western bloting和ELISA方法检测其抗原性.[结果]Hc38基因在大肠杆菌中高效表达,表达的融合蛋白相对分子量约为68 KD,表达量占菌体蛋白总量的30%,亲和层析柱纯化出目的蛋白,并能被捻转血矛线虫病绵羊阳性血清和重组表达产物免疫小鼠血清识别,具有反应原性.[结论]实现了Hc38基因的原核表达和纯化,验证了Hc38基因在虫体内的表达形式和抗原性.
[목적]통과표체화순화념전혈모선충신공능기인He38최대개방열독광ORF1,학정완정적Hc38단백천연표체형식、분자량대소화면역학활성감정,위연구해기인공능화기인공정응용전정기출.[방법]삼조본실험실재GenBank상등록적념전혈모선충ZJ주적He38기인서렬(AY594263)설계인물,PCR확증목적기인병극륭도표체재체중,중조표체재체전화대장간균후IPTG유도표체,SDS-PAGE화박층소묘검측분석표체산물,통과친화층석주대중조단백진행순화,병용Western bloting화ELISA방법검측기항원성.[결과]Hc38기인재대장간균중고효표체,표체적융합단백상대분자량약위68 KD,표체량점균체단백총량적30%,친화층석주순화출목적단백,병능피념전혈모선충병면양양성혈청화중조표체산물면역소서혈청식별,구유반응원성.[결론]실현료Hc38기인적원핵표체화순화,험증료Hc38기인재충체내적표체형식화항원성.