基因组学与应用生物学
基因組學與應用生物學
기인조학여응용생물학
GENOMICS AND APPLIED BIOLOGY
2011年
4期
257-264
,共8页
融合筛选标记%Bar::gus%融合重组酶位点%LoxP/FRT%植物遗传转化
融閤篩選標記%Bar::gus%融閤重組酶位點%LoxP/FRT%植物遺傳轉化
융합사선표기%Bar::gus%융합중조매위점%LoxP/FRT%식물유전전화
本研究利用化学合成法合成了包含pCAMBIA0390左右边界T-DNA和LoxP/FRT (LF)位点的DNA片段Ⅰ,利用SacⅡ和SphⅠ酶切位点,去除了pCAMBIA0390左右边界T-DNA和多克隆位点之间的序列,然后连接DNA片段Ⅰ和载体片段,构建了植物表达载体pGM323-LF-enTP.随后,再合成含有适合在单子叶植物中表达的由玉米Ubi-1启动子驱动的融合标记基因(Bar::gus)和水稻actin-1启动子驱动的Bt抗虫蛋白基因(Cry1Ab)表达元件的DNA片段Ⅳ,在pGM323-LF-enTP的基础上,利用SalⅠ和PstⅠ位点构建了同时含有LF位点、Bar::gus以及Cry1Ab基因表达元件的表达载体pGM626-LF-ABt.利用含有pGM626-LF-ABt的农杆菌遗传转化烟草和玉米,以草丁膦作为抗性筛选剂,非转化细胞得到了有效抑制,快速获得了转基因植株,利用GUS组织化学检测和RT-PCR分析了转基因植株中标记基因的表达,结果表明pGM626-LF-ABt可以用于农杆菌介导的单、双子叶植物遗传转化.本研究为培育安全抗虫转基因植物奠定了基础.
本研究利用化學閤成法閤成瞭包含pCAMBIA0390左右邊界T-DNA和LoxP/FRT (LF)位點的DNA片段Ⅰ,利用SacⅡ和SphⅠ酶切位點,去除瞭pCAMBIA0390左右邊界T-DNA和多剋隆位點之間的序列,然後連接DNA片段Ⅰ和載體片段,構建瞭植物錶達載體pGM323-LF-enTP.隨後,再閤成含有適閤在單子葉植物中錶達的由玉米Ubi-1啟動子驅動的融閤標記基因(Bar::gus)和水稻actin-1啟動子驅動的Bt抗蟲蛋白基因(Cry1Ab)錶達元件的DNA片段Ⅳ,在pGM323-LF-enTP的基礎上,利用SalⅠ和PstⅠ位點構建瞭同時含有LF位點、Bar::gus以及Cry1Ab基因錶達元件的錶達載體pGM626-LF-ABt.利用含有pGM626-LF-ABt的農桿菌遺傳轉化煙草和玉米,以草丁膦作為抗性篩選劑,非轉化細胞得到瞭有效抑製,快速穫得瞭轉基因植株,利用GUS組織化學檢測和RT-PCR分析瞭轉基因植株中標記基因的錶達,結果錶明pGM626-LF-ABt可以用于農桿菌介導的單、雙子葉植物遺傳轉化.本研究為培育安全抗蟲轉基因植物奠定瞭基礎.
본연구이용화학합성법합성료포함pCAMBIA0390좌우변계T-DNA화LoxP/FRT (LF)위점적DNA편단Ⅰ,이용SacⅡ화SphⅠ매절위점,거제료pCAMBIA0390좌우변계T-DNA화다극륭위점지간적서렬,연후련접DNA편단Ⅰ화재체편단,구건료식물표체재체pGM323-LF-enTP.수후,재합성함유괄합재단자협식물중표체적유옥미Ubi-1계동자구동적융합표기기인(Bar::gus)화수도actin-1계동자구동적Bt항충단백기인(Cry1Ab)표체원건적DNA편단Ⅳ,재pGM323-LF-enTP적기출상,이용SalⅠ화PstⅠ위점구건료동시함유LF위점、Bar::gus이급Cry1Ab기인표체원건적표체재체pGM626-LF-ABt.이용함유pGM626-LF-ABt적농간균유전전화연초화옥미,이초정련작위항성사선제,비전화세포득도료유효억제,쾌속획득료전기인식주,이용GUS조직화학검측화RT-PCR분석료전기인식주중표기기인적표체,결과표명pGM626-LF-ABt가이용우농간균개도적단、쌍자협식물유전전화.본연구위배육안전항충전기인식물전정료기출.
