农业生物技术学报
農業生物技術學報
농업생물기술학보
JOURNAL OF AGRICULTURAL BIOTECHNOLOGY
2011年
5期
960-966
,共7页
王韵斐%陈秋菊%崔易虹%杨明明%曹斌云
王韻斐%陳鞦菊%崔易虹%楊明明%曹斌雲
왕운비%진추국%최역홍%양명명%조빈운
人白血病抑制因子%山羊β-酪蛋白%同源重组%乳腺生物反应器
人白血病抑製因子%山羊β-酪蛋白%同源重組%乳腺生物反應器
인백혈병억제인자%산양β-락단백%동원중조%유선생물반응기
为了实现人白血病抑制因子基因(hLIF)在奶山羊乳腺上皮细胞中的稳定表达,本实验利用条件重组元件LoxP序列、山羊β-酪蛋白5'和3'同源臂、正负向筛选标记基因和hLIF基因构建hLIF基因打靶载体.脂质体法转染奶山羊(capra hircus)乳腺上皮细胞,进行遗传霉素(G418)和丙氧鸟苷(GANC)筛选获得同源重组的阳性克隆,并通过PCR、实时定量PCR和Western blot检测阳性克隆中hLIF基因的表达情况.酶切和测序分析结果显示,实验成功构建了hLIF基因打靶载体pLoxP-NT53L.阳性克降经PCR、实时定量PCR和Western blot均检测到了目的条带.表明打靶载体pLoxP-NT53L已经成功整合至山羊β-酪蛋白基因座中,并能在奶山羊乳腺上皮细胞中特异性表达hLIF蛋白.为无抗性标记的转hLIF基因奶山羊生产提供了打靶载体.
為瞭實現人白血病抑製因子基因(hLIF)在奶山羊乳腺上皮細胞中的穩定錶達,本實驗利用條件重組元件LoxP序列、山羊β-酪蛋白5'和3'同源臂、正負嚮篩選標記基因和hLIF基因構建hLIF基因打靶載體.脂質體法轉染奶山羊(capra hircus)乳腺上皮細胞,進行遺傳黴素(G418)和丙氧鳥苷(GANC)篩選穫得同源重組的暘性剋隆,併通過PCR、實時定量PCR和Western blot檢測暘性剋隆中hLIF基因的錶達情況.酶切和測序分析結果顯示,實驗成功構建瞭hLIF基因打靶載體pLoxP-NT53L.暘性剋降經PCR、實時定量PCR和Western blot均檢測到瞭目的條帶.錶明打靶載體pLoxP-NT53L已經成功整閤至山羊β-酪蛋白基因座中,併能在奶山羊乳腺上皮細胞中特異性錶達hLIF蛋白.為無抗性標記的轉hLIF基因奶山羊生產提供瞭打靶載體.
위료실현인백혈병억제인자기인(hLIF)재내산양유선상피세포중적은정표체,본실험이용조건중조원건LoxP서렬、산양β-락단백5'화3'동원비、정부향사선표기기인화hLIF기인구건hLIF기인타파재체.지질체법전염내산양(capra hircus)유선상피세포,진행유전매소(G418)화병양조감(GANC)사선획득동원중조적양성극륭,병통과PCR、실시정량PCR화Western blot검측양성극륭중hLIF기인적표체정황.매절화측서분석결과현시,실험성공구건료hLIF기인타파재체pLoxP-NT53L.양성극강경PCR、실시정량PCR화Western blot균검측도료목적조대.표명타파재체pLoxP-NT53L이경성공정합지산양β-락단백기인좌중,병능재내산양유선상피세포중특이성표체hLIF단백.위무항성표기적전hLIF기인내산양생산제공료타파재체.
