生物技术通报
生物技術通報
생물기술통보
BIOTECHNOLOGY BULLETIN
2012年
1期
104-107
,共4页
口蹄疫病毒%VP0基因%原核表达
口蹄疫病毒%VP0基因%原覈錶達
구제역병독%VP0기인%원핵표체
从实验室冻存的含A型口蹄疫病毒的细胞中提取FMDV总RNA,通过RT-PCR获得cDNA.并根据FMDV全基因组序列设计了一对针对VP0基因的引物,通过PCR扩增得到目的基因VP0并亚克隆入pMD18-T载体.将鉴定出的阳性质粒和表达载体pET32a用BamH Ⅰ和HindⅢ双酶切回收后连接获得阳性重组质粒pET32-VP0.用IPTG诱导重组质粒表达目的蛋白VP0并用SDS-PAGE进行检测.表达产物用镍亲和树脂进行了纯化.结果证明,口蹄疫病毒VP0蛋白在大肠杆菌中获得了高效表达且表达产物得到了纯化,为实验室进一步的研究提供了重要的材料.
從實驗室凍存的含A型口蹄疫病毒的細胞中提取FMDV總RNA,通過RT-PCR穫得cDNA.併根據FMDV全基因組序列設計瞭一對針對VP0基因的引物,通過PCR擴增得到目的基因VP0併亞剋隆入pMD18-T載體.將鑒定齣的暘性質粒和錶達載體pET32a用BamH Ⅰ和HindⅢ雙酶切迴收後連接穫得暘性重組質粒pET32-VP0.用IPTG誘導重組質粒錶達目的蛋白VP0併用SDS-PAGE進行檢測.錶達產物用鎳親和樹脂進行瞭純化.結果證明,口蹄疫病毒VP0蛋白在大腸桿菌中穫得瞭高效錶達且錶達產物得到瞭純化,為實驗室進一步的研究提供瞭重要的材料.
종실험실동존적함A형구제역병독적세포중제취FMDV총RNA,통과RT-PCR획득cDNA.병근거FMDV전기인조서렬설계료일대침대VP0기인적인물,통과PCR확증득도목적기인VP0병아극륭입pMD18-T재체.장감정출적양성질립화표체재체pET32a용BamH Ⅰ화HindⅢ쌍매절회수후련접획득양성중조질립pET32-VP0.용IPTG유도중조질립표체목적단백VP0병용SDS-PAGE진행검측.표체산물용얼친화수지진행료순화.결과증명,구제역병독VP0단백재대장간균중획득료고효표체차표체산물득도료순화,위실험실진일보적연구제공료중요적재료.