中山大学学报（自然科学版）
中山大學學報（自然科學版）
중산대학학보（자연과학판）
ACTA SCIENTIARUM NATURALIUM UNIVERSITATIS SUNYATSENI
2012年
2期
73-76,85
,共5页
张如华%徐双兵%武远众%康铁邦
張如華%徐雙兵%武遠衆%康鐵邦
장여화%서쌍병%무원음%강철방
hSSB1%病毒载体%稳定株
hSSB1%病毒載體%穩定株
hSSB1%병독재체%은정주
hSSB1(Human Single-strand DNA-binding protein)是参与细胞DNA损伤应答的一个重要信号分子.根据GenBank提供的hSSB1基因序列扩增其cDNA序列,插入到pBABE逆转录病毒载体中,连接后的质粒转化后经过双酶切,PCR扩增及测序来鉴定pBABE-hSSB1阳性克隆.将阳性表达的pBABE-hSSB1和包装质粒转染到HEK293T细胞中,产生病毒液.将包装好的病毒感染细胞并用嘌呤霉素(puromycin)筛选稳定表达hSSB1的细胞株.重组pBABE-hSSB1质粒经双酶切,PCR扩增鉴定及DNA测序分析等方法证实克隆成功.Western blotting 检测发现转染重组质粒pBABE-hSSB1的细胞株中hSSB1蛋白的表达水平高于对照组.该研究成功构建了针对hSSB1基因的逆转录病毒载体(pBABE-hSSB1),并得到了稳定高表达hSSB1的细胞株,为深入研究其功能奠定了基础.
hSSB1(Human Single-strand DNA-binding protein)是參與細胞DNA損傷應答的一箇重要信號分子.根據GenBank提供的hSSB1基因序列擴增其cDNA序列,插入到pBABE逆轉錄病毒載體中,連接後的質粒轉化後經過雙酶切,PCR擴增及測序來鑒定pBABE-hSSB1暘性剋隆.將暘性錶達的pBABE-hSSB1和包裝質粒轉染到HEK293T細胞中,產生病毒液.將包裝好的病毒感染細胞併用嘌呤黴素(puromycin)篩選穩定錶達hSSB1的細胞株.重組pBABE-hSSB1質粒經雙酶切,PCR擴增鑒定及DNA測序分析等方法證實剋隆成功.Western blotting 檢測髮現轉染重組質粒pBABE-hSSB1的細胞株中hSSB1蛋白的錶達水平高于對照組.該研究成功構建瞭針對hSSB1基因的逆轉錄病毒載體(pBABE-hSSB1),併得到瞭穩定高錶達hSSB1的細胞株,為深入研究其功能奠定瞭基礎.
hSSB1(Human Single-strand DNA-binding protein)시삼여세포DNA손상응답적일개중요신호분자.근거GenBank제공적hSSB1기인서렬확증기cDNA서렬,삽입도pBABE역전록병독재체중,련접후적질립전화후경과쌍매절,PCR확증급측서래감정pBABE-hSSB1양성극륭.장양성표체적pBABE-hSSB1화포장질립전염도HEK293T세포중,산생병독액.장포장호적병독감염세포병용표령매소(puromycin)사선은정표체hSSB1적세포주.중조pBABE-hSSB1질립경쌍매절,PCR확증감정급DNA측서분석등방법증실극륭성공.Western blotting 검측발현전염중조질립pBABE-hSSB1적세포주중hSSB1단백적표체수평고우대조조.해연구성공구건료침대hSSB1기인적역전록병독재체(pBABE-hSSB1),병득도료은정고표체hSSB1적세포주,위심입연구기공능전정료기출.
