生物技术通报
生物技術通報
생물기술통보
BIOTECHNOLOGY BULLETIN
2012年
4期
170-175
,共6页
黄朋%范升龙%凌敏%贺菽嘉%周素芳
黃朋%範升龍%凌敏%賀菽嘉%週素芳
황붕%범승룡%릉민%하숙가%주소방
SMP30%基因工程%表达与纯化%分子伴侣质粒%共表达
SMP30%基因工程%錶達與純化%分子伴侶質粒%共錶達
SMP30%기인공정%표체여순화%분자반려질립%공표체
旨在通过应用基因工程的方法构建、表达和纯化肝癌相关抗原SMP30,研究共表达分子伴侣提高基因工程蛋白表达的可溶性及效率.PCR扩增SMP30 cDNA序列,用基因工程技术构建重组表达质粒,转化E.coli BL21( DE3) pLysS宿主菌.表达蛋白经Ni-NTA亲和柱纯化获得HIS-SMP30融合蛋白；分别将4种表达不同分子伴侣的质粒(pG-KJE8、pGro7、pKJE7、pTf16)转入E.coli BL21( DE3)中；然后再将重组质粒转入含有分子伴侣质粒的细胞中,进行分子伴侣与重组质粒的共表达,SDS-PAGE检测目的蛋白的表达量与可溶性分析.经优化表达条件后,目的蛋白以包涵体形式表达,目的蛋白占总蛋白的60％以上；纯化后纯度高达95％以上;诱导共表达后,目的蛋白在上清含量极少,不到总表达目的蛋白的10％.成功构建出高效表达的SMP30重组质粒；加入到诱导表达体系中的4种分子伴侣质粒不能有效的促进可溶性蛋白的表达,pTf16共表达系统能增加目的蛋白表达量.
旨在通過應用基因工程的方法構建、錶達和純化肝癌相關抗原SMP30,研究共錶達分子伴侶提高基因工程蛋白錶達的可溶性及效率.PCR擴增SMP30 cDNA序列,用基因工程技術構建重組錶達質粒,轉化E.coli BL21( DE3) pLysS宿主菌.錶達蛋白經Ni-NTA親和柱純化穫得HIS-SMP30融閤蛋白；分彆將4種錶達不同分子伴侶的質粒(pG-KJE8、pGro7、pKJE7、pTf16)轉入E.coli BL21( DE3)中；然後再將重組質粒轉入含有分子伴侶質粒的細胞中,進行分子伴侶與重組質粒的共錶達,SDS-PAGE檢測目的蛋白的錶達量與可溶性分析.經優化錶達條件後,目的蛋白以包涵體形式錶達,目的蛋白佔總蛋白的60％以上；純化後純度高達95％以上;誘導共錶達後,目的蛋白在上清含量極少,不到總錶達目的蛋白的10％.成功構建齣高效錶達的SMP30重組質粒；加入到誘導錶達體繫中的4種分子伴侶質粒不能有效的促進可溶性蛋白的錶達,pTf16共錶達繫統能增加目的蛋白錶達量.
지재통과응용기인공정적방법구건、표체화순화간암상관항원SMP30,연구공표체분자반려제고기인공정단백표체적가용성급효솔.PCR확증SMP30 cDNA서렬,용기인공정기술구건중조표체질립,전화E.coli BL21( DE3) pLysS숙주균.표체단백경Ni-NTA친화주순화획득HIS-SMP30융합단백；분별장4충표체불동분자반려적질립(pG-KJE8、pGro7、pKJE7、pTf16)전입E.coli BL21( DE3)중；연후재장중조질립전입함유분자반려질립적세포중,진행분자반려여중조질립적공표체,SDS-PAGE검측목적단백적표체량여가용성분석.경우화표체조건후,목적단백이포함체형식표체,목적단백점총단백적60％이상；순화후순도고체95％이상;유도공표체후,목적단백재상청함량겁소,불도총표체목적단백적10％.성공구건출고효표체적SMP30중조질립；가입도유도표체체계중적4충분자반려질립불능유효적촉진가용성단백적표체,pTf16공표체계통능증가목적단백표체량.
