中华血液学杂志
中華血液學雜誌
중화혈액학잡지
Chinese Journal of Hematology
2007年
5期
298-302
,共5页
任亚娜%范华骅%高跞%聂晓绚%杨洁%刘嬿%高峰
任亞娜%範華驊%高躒%聶曉絢%楊潔%劉嬿%高峰
임아나%범화화%고력%섭효현%양길%류연%고봉
树突细胞%exosomes%肿瘤免疫
樹突細胞%exosomes%腫瘤免疫
수돌세포%exosomes%종류면역
目的 建立树突细胞(DC)分泌的exosomes的制备方法,分析其生物学特性及其在抗肿瘤免疫中的功能.方法 从正常人外周血单个核细胞中诱导未成熟DC(imDC),并使其负载K562细胞的抗原,然后用脂多糖(LPS)诱导DC成熟(mDC),通过超速离心结合膜超滤的方法分别提取imDC和mDC分泌的exosomes.检测exosomes的粒径并通过电子显微镜分析exosomes的形态,Western blot法检测exosomes的表面分子.比较mDC和imDC分泌的exosomes引起的针对K562抗原特异性T细胞的增殖、CD69的上调、细胞因子IFN-γ的分泌及对肿瘤细胞的杀伤能力.结果 制备的exosomes为碟状小囊泡,平均直径为72.3 nm,表达CD80、CD86、HLA-DR、FasL、CD54和乳脂肪球-表皮生长因子-因子Ⅷ(MFG-E8).与imDC相比,mDC分泌的exosomes CD80表达较高而MFG-E8的表达较低,并且在体外mDC分泌的exosomes能够更显著地引起特异性T细胞的增殖和免疫应答:在exosomes最适浓度下,T细胞增殖的吸光度值为0.50±0.01,激活T细胞的CD69上调,并且有(13.4±5.8)%T细胞扩增,(22.8±2.4)%的T细胞产生细胞因子IFN-γ,对肿瘤细胞的杀伤率为(21.3±8.6)%.结论 建立了简便、快速的exosomes分离纯化方法,所分离的exosomes具有引起抗肿瘤免疫应答的功能.
目的 建立樹突細胞(DC)分泌的exosomes的製備方法,分析其生物學特性及其在抗腫瘤免疫中的功能.方法 從正常人外週血單箇覈細胞中誘導未成熟DC(imDC),併使其負載K562細胞的抗原,然後用脂多糖(LPS)誘導DC成熟(mDC),通過超速離心結閤膜超濾的方法分彆提取imDC和mDC分泌的exosomes.檢測exosomes的粒徑併通過電子顯微鏡分析exosomes的形態,Western blot法檢測exosomes的錶麵分子.比較mDC和imDC分泌的exosomes引起的針對K562抗原特異性T細胞的增殖、CD69的上調、細胞因子IFN-γ的分泌及對腫瘤細胞的殺傷能力.結果 製備的exosomes為碟狀小囊泡,平均直徑為72.3 nm,錶達CD80、CD86、HLA-DR、FasL、CD54和乳脂肪毬-錶皮生長因子-因子Ⅷ(MFG-E8).與imDC相比,mDC分泌的exosomes CD80錶達較高而MFG-E8的錶達較低,併且在體外mDC分泌的exosomes能夠更顯著地引起特異性T細胞的增殖和免疫應答:在exosomes最適濃度下,T細胞增殖的吸光度值為0.50±0.01,激活T細胞的CD69上調,併且有(13.4±5.8)%T細胞擴增,(22.8±2.4)%的T細胞產生細胞因子IFN-γ,對腫瘤細胞的殺傷率為(21.3±8.6)%.結論 建立瞭簡便、快速的exosomes分離純化方法,所分離的exosomes具有引起抗腫瘤免疫應答的功能.
목적 건립수돌세포(DC)분비적exosomes적제비방법,분석기생물학특성급기재항종류면역중적공능.방법 종정상인외주혈단개핵세포중유도미성숙DC(imDC),병사기부재K562세포적항원,연후용지다당(LPS)유도DC성숙(mDC),통과초속리심결합막초려적방법분별제취imDC화mDC분비적exosomes.검측exosomes적립경병통과전자현미경분석exosomes적형태,Western blot법검측exosomes적표면분자.비교mDC화imDC분비적exosomes인기적침대K562항원특이성T세포적증식、CD69적상조、세포인자IFN-γ적분비급대종류세포적살상능력.결과 제비적exosomes위설상소낭포,평균직경위72.3 nm,표체CD80、CD86、HLA-DR、FasL、CD54화유지방구-표피생장인자-인자Ⅷ(MFG-E8).여imDC상비,mDC분비적exosomes CD80표체교고이MFG-E8적표체교저,병차재체외mDC분비적exosomes능구경현저지인기특이성T세포적증식화면역응답:재exosomes최괄농도하,T세포증식적흡광도치위0.50±0.01,격활T세포적CD69상조,병차유(13.4±5.8)%T세포확증,(22.8±2.4)%적T세포산생세포인자IFN-γ,대종류세포적살상솔위(21.3±8.6)%.결론 건립료간편、쾌속적exosomes분리순화방법,소분리적exosomes구유인기항종류면역응답적공능.
