安徽医科大学学报
安徽醫科大學學報
안휘의과대학학보
ACTA UNIVERSITY MEDICINALIS ANHUI
2005年
1期
16-19
,共4页
周正春%陈兵%张胜权%罗欣%徐从贞%汪思应%葛建军
週正春%陳兵%張勝權%囉訢%徐從貞%汪思應%葛建軍
주정춘%진병%장성권%라흔%서종정%왕사응%갈건군
血管内皮生长因子类%克隆,分子%逆转录聚合酶链反应%基因表达
血管內皮生長因子類%剋隆,分子%逆轉錄聚閤酶鏈反應%基因錶達
혈관내피생장인자류%극륭,분자%역전록취합매련반응%기인표체
目的克隆人血管内皮生长因子基因VEGF165片段,构建pcDNA3·1/hVEGF165,观察其在COS-7细胞中的表达,为基因治疗缺血性心脏病奠定基础. 方法从胎儿心肌组织中提取总RNA,应用RT-PCR方法获得hVEGF165基因,将其重组入T载体,PCR法鉴定并测序,双酶切后克隆入真核表达载体pcDNA3.1/myc-his-B中,构建pcDNA3.1/hVEGF165重组体.用脂质体介导将其转染COS-7细胞,Western Blotting 方法检测rhVEGF165的表达蛋白. 结果 RT-PCR方法从胎儿心肌组织获得正确的hVEGF165基因序列,成功构建pcDNA3·1/hVEGF165且实现转染COS-7细胞的瞬时表达.结论该实验构建的pcDNA3·1/hVEGF165 转染真核细胞COS-7能够表达rhVEGF蛋白.
目的剋隆人血管內皮生長因子基因VEGF165片段,構建pcDNA3·1/hVEGF165,觀察其在COS-7細胞中的錶達,為基因治療缺血性心髒病奠定基礎. 方法從胎兒心肌組織中提取總RNA,應用RT-PCR方法穫得hVEGF165基因,將其重組入T載體,PCR法鑒定併測序,雙酶切後剋隆入真覈錶達載體pcDNA3.1/myc-his-B中,構建pcDNA3.1/hVEGF165重組體.用脂質體介導將其轉染COS-7細胞,Western Blotting 方法檢測rhVEGF165的錶達蛋白. 結果 RT-PCR方法從胎兒心肌組織穫得正確的hVEGF165基因序列,成功構建pcDNA3·1/hVEGF165且實現轉染COS-7細胞的瞬時錶達.結論該實驗構建的pcDNA3·1/hVEGF165 轉染真覈細胞COS-7能夠錶達rhVEGF蛋白.
목적극륭인혈관내피생장인자기인VEGF165편단,구건pcDNA3·1/hVEGF165,관찰기재COS-7세포중적표체,위기인치료결혈성심장병전정기출. 방법종태인심기조직중제취총RNA,응용RT-PCR방법획득hVEGF165기인,장기중조입T재체,PCR법감정병측서,쌍매절후극륭입진핵표체재체pcDNA3.1/myc-his-B중,구건pcDNA3.1/hVEGF165중조체.용지질체개도장기전염COS-7세포,Western Blotting 방법검측rhVEGF165적표체단백. 결과 RT-PCR방법종태인심기조직획득정학적hVEGF165기인서렬,성공구건pcDNA3·1/hVEGF165차실현전염COS-7세포적순시표체.결론해실험구건적pcDNA3·1/hVEGF165 전염진핵세포COS-7능구표체rhVEGF단백.
