CAJ | 학술논문

目的:我们所研创的pRSETa-B7-2-PE40KDEL/BL21 pLysE工程菌通常情况下更多的是以包涵体形式为主,而少部分为可溶形式,本研究试图在不改变其结构而仅通过优化各种已知影响原核表达系统的相关因素而获得稳定、高效的几乎全部以可溶性形式表达的重组B7-2-PE40KDEL融合蛋白.方法:针对更换不同的培养基、降低或升高诱导温度、增加或减少IPTG的用量、延长或缩短诱导时间等诸多能够增加可溶性表达量的各种因素进行较为系统的探索.结果:该工程菌在无压力选择条件下传代50代后的表达稳定性约为60%;通过大量对比研究,我们最终确定了pRSETa-B7-2-PE40KDEL/BL21 pLysE菌种的最佳培养诱导表达方案:即过夜活化的菌种以2%浓度接种于2YT培养基,22℃培养至D值约为0.4时加入0.1 mmol/L IPTG,诱导12 h,由此可获得较高水平的、稳定的、几乎全部为可溶性表达的重组B7-2-PE40KDEL融合蛋白,目的蛋白量占菌体总蛋白的≥24%.结论:通过优化各种已知影响原核表达系统的相关因素,获得了稳定、高效的几乎全部以可溶性形式表达的重组B7-2-PE40KDEL融合蛋白的工程菌,为进一步有效分离纯化该蛋白奠定了基础.
목적:아문소연창적pRSETa-B7-2-PE40KDEL/BL21 pLysE공정균통상정황하경다적시이포함체형식위주,이소부분위가용형식,본연구시도재불개변기결구이부통과우화각충이지영향원핵표체계통적상관인소이획득은정、고효적궤호전부이가용성형식표체적중조B7-2-PE40KDEL융합단백.방법:침대경환불동적배양기、강저혹승고유도온도、증가혹감소IPTG적용량、연장혹축단유도시간등제다능구증가가용성표체량적각충인소진행교위계통적탐색.결과:해공정균재무압력선택조건하전대50대후적표체은정성약위60%;통과대량대비연구,아문최종학정료pRSETa-B7-2-PE40KDEL/BL21 pLysE균충적최가배양유도표체방안:즉과야활화적균충이2%농도접충우2YT배양기,22℃배양지D치약위0.4시가입0.1 mmol/L IPTG,유도12 h,유차가획득교고수평적、은정적、궤호전부위가용성표체적중조B7-2-PE40KDEL융합단백,목적단백량점균체총단백적≥24%.결론:통과우화각충이지영향원핵표체계통적상관인소,획득료은정、고효적궤호전부이가용성형식표체적중조B7-2-PE40KDEL융합단백적공정균,위진일보유효분리순화해단백전정료기출.